GOT2在卵巢癌中的作用及其機制研究

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1、暨南大學碩士學位論文GOT2在卵巢癌中的作用及其機制研究TheRoleandMechanismofGOT2inOvarianCancer作者姓名:樊晶指導教師姓名徐萌及學位、職稱:博士、教授、主任醫(yī)師、博士生導師學科、專業(yè)名稱:腫瘤學學位類型:專業(yè)學位論文提交日期:2018年4月論文答辯日期:2018年5月答辯委員會主席:向軍儉論文評閱人:1暨南大學碩士學位論文2暨南大學碩士學位論文摘要目的:探討谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-oxaloacetictransaminase2,GOT2)在卵巢癌發(fā)生發(fā)展

2、中的作用,并闡述其機制可能與GOT2通過PI3K/Akt/mTOR信號通路干擾細胞營養(yǎng)代謝誘導細胞發(fā)生異常自噬相關(guān)。方法:選擇人卵巢癌c13*細胞系作為實驗模型。采用慢病毒包裝病毒系統(tǒng)建立穩(wěn)定敲除的GOT2和AKT細胞系,計數(shù)法和CCK8法檢測谷草轉(zhuǎn)氨酶GOT2敲除后體外對卵巢癌細胞c13*增殖活性的影響;顯微鏡下觀察c13*細胞敲除GOT2后形態(tài)學變化;共聚焦顯微鏡下觀察敲除GOT2后感染GFP-LC3時綠色熒光的分布;免疫印跡法檢測p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、p62、LC3的蛋白水

3、平。結(jié)果:(1)谷草轉(zhuǎn)氨酶GOT2敲除后體外對c13*細胞的增殖具有明顯抑制作用,且細胞形態(tài)學表現(xiàn)為細胞變大。(2)c13*細胞在谷草轉(zhuǎn)氨酶GOT2敲除后發(fā)生了細胞自噬形態(tài)學變化。(3)p-AKT、p-mTOR、LC3Ⅰ、p62逐漸減弱,LC3Ⅱ蛋白的表達逐漸上升。結(jié)論:谷草轉(zhuǎn)氨酶GOT2敲除后在體外對卵巢癌細胞c13*具有明顯的抑制作用,細胞內(nèi)出現(xiàn)明顯的自噬形態(tài)學變化,其作用機制可能與敲除GOT2后通過抑制信號通路PI3K/Akt/mTOR的活性干擾細胞內(nèi)營養(yǎng)能量代謝誘導細胞產(chǎn)生異常的自噬活動有關(guān)。

4、關(guān)鍵詞:谷草轉(zhuǎn)氨酶;卵巢癌;p-AKT;p-mTOR;自噬3暨南大學碩士學位論文AbstractObjective:Theroleofglutamic-oxaloacetictransaminase2(GOT2)inovariancanceranditspossiblemechanism.Methods:Humanovariancancerc13*celllinewasselectedasanexperimentalmodel.ThestableknockoutGOT2andAKTcelllinesw

5、ereestablishedusingthelentiviralpackagingvirussystem.TheeffectsofGOT2knockoutontheproliferationofovariancancercellsc13*invitroweredeterminedbycountingandCCK8assay;ThecellmorphologicalchangesobservedunderthemicroscopeafterGOT2knockout.Theautophagicmorpho

6、logicalchangeswereobservedafterGOT2infectedwithlentivirus;ThedistributionofgreenfluorescencewasobservedbyconfocalmicroscopeaftertransfectionwithGFP-LC3;Theproteinlevelsofp-AKT,AKT,p-mTOR,mTOR,p62,andLC3weredetectedbyWesternblotting.Results:(1)Itobviousi

7、nhibitestheproliferationofc13*cellsinvitroafterGOT2knockout.(2)Morphologicalchangesofautophagyoccurredinc13*cellsafterGOT2knockout.(3)Theexpressionofp-AKT,p-mTOR,p62andLC3Iwasdecreased,andtheexpressionofLC3IIwasgraduallyincreased.ConclusionTheGOT2knock-

8、outhasasignificantinhibitoryeffectonovariancancercellc13*invitro.ItspotentialmechanismmayberelatedtotheinterferenceofnutritionalandenergymetabolismbyinhibitingthesignalingpathwayofPI3K/Akt/mTORafterknock-outGOT2.Keywords:Aspartat

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