酪蛋白水解物的類蛋白反應修飾及其產物ACE抑制活性特征

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資源描述:

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1、602011,Vo1.32,No.19食品科孛※基礎研究酪蛋白水解物的類蛋白反應修飾及其產物ACE抑制清眭特征孫輝,趙新淮f乳品科學教育部重點實驗室,東北農業(yè)大學,黑龍江哈爾濱150030)摘要:采用堿性蛋白酶水解酪蛋白,制備水解度為10.9%、IC5o值為52.6~tg/mL的酪蛋白水解物,并利用響應面法優(yōu)化堿性蛋A酶催化的類蛋白反應修飾條件。修飾反應時間固定為6h時,適宜的條件為酶添加量3.1kU/gpro、底物質最濃度50g/100mL、反應溫度25℃。制備9個修飾程度不同的修飾產物,結果顯示:修飾產物ACE抑制活性均提高,并且活性最高的修飾產物的IC5o降低至14.9g/

2、mL。該修飾產物離心分級后,上清液部分和沉淀部分的ACE抑制活性分別低于和高于修飾產物,表明沉淀部分是提高ACE抑制活性的主要原因;Tricine.SDS—PAGE電泳分析表明,修飾產物及沉淀部分有較大分子質量的肽分子生成;該修飾產物和上清液部分、沉淀部分的進一步酶水解處理則顯示,酶水解會導致它們的ACE抑制活性降低,但是仍然高于最初的酪蛋白水解物。關鍵詞:酪蛋白水解物;堿性蛋白酶;類蛋白反應;ACE抑制活性ModificationofCaseinHydrolysatebyAlcalase-catalyzedPlasteinReactionandACE-·inhibitoryAc

3、tivityofModifiedProductsSUNHui,ZHA0Xin.huai*(KeyLaboratoryofDairyScience,MinistryofEducation,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,China)Abstract:Caseinhydrolysatewithahydrolysisdegreeof10.9%andanACE-inhibitoryICs0of52.6ug/mEWaSpreparedbyhydrolyzingcaseinwithalcalaseandthenmodifiedbyal

4、calase—catalyzedplasteinreaction.Whenthereactiontimewasfixedat6h,theoptimalreactionconditionswereachievedbyresponsesurfacemethodologytobeenzymedosageof3.1kU/gprotein,reactiontemperatureof25℃andsubstrateconcentrationof50g/100mL.Ninemodifiedcaseinhydrolysateswithdifferentmodificationdegreeswere

5、prepared.TheresultsindicatedthateachmodifiedcaseinhydrolysatehadenhancedACE-inhibitoryactivity.TheICsoofthemodifiedhydrolysatewiththehighestactivityWas14.91ag/mL.Thismodifiedhydrolysatewascentrifugedintotwofractions,asupematantandaprecipitationfraction.Thesupematantandprecipitationfractionsre

6、vealedareducedandenhancedACE—inhibitoryactivitywhencomparedwiththeirsuspension,suggestingthattheprecipitationfractionaccountedmainlyfortheimprovedactivityofthemodifiedhydrolysate.Tricine-SDS—PAGEelectrophoresisanalysisalsoshowedthatsoftienewpeptideswithhJghermolecnlarweightsweregeneratedinthe

7、modifiedhydrolysateandtheprecipirationfaction.Thefl~erenzy—mafichydrolysisofthesupematantandprecipirationfractionscouldresultintheimpairmentofACE—inhibitoryactivity.Keywords:caseinhydrolysate;alcalase;plasteinreaction;ACEinhibitoryactivity中圖分

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