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《地中海實蠅及其近緣種和桔小實蠅復(fù)合種基因芯片的研制及應(yīng)用》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、摘要檢疫性實蠅的鑒定是國際果蔬貿(mào)易中最突出的技術(shù)問題之一。我國農(nóng)業(yè)部最新頒布的進(jìn)境植物檢疫性有害生物名錄將小條實蠅屬Ceratitis、果實蠅屬BactroceraylJ入其中。目前，實蠅的口岸檢疫鑒定以傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定為主，此方法對鑒定者經(jīng)驗依賴性強(qiáng)，受實蠅蟲態(tài)、飼養(yǎng)周期等的限制。常規(guī)分子生物學(xué)的方法，如PCR、探針雜交等檢測技術(shù)只能一次對一種實蠅進(jìn)行檢測，不能滿足實際檢測的需要。基因芯片技術(shù)不但可以彌補(bǔ)上述方法自動化程度低、檢測分子數(shù)量少和低通量等不足之處，而且能大大提高檢測效率。本研究應(yīng)用基因芯片技術(shù)，建立了地中海實
2、蠅Ccapitata及其近緣種和桔小實蠅丑dorsalis復(fù)合種兩種基因芯片，用于地中海實蠅三個近緣種和桔小實蠅五個復(fù)合種的鑒定，同時具有小條實蠅屬、果實蠅屬實蠅初篩的功能。本研究獲得了如下主要結(jié)果：1．地中海實蠅及其近緣種和桔小實蠅復(fù)合種基因芯片的制備選擇線粒體DNA(mtDNA)細(xì)胞色素氧化酶I基I因(COI)為分子標(biāo)記基因，根據(jù)Genbank發(fā)表的實蠅科昆蟲mtDNA．COI序列，運(yùn)用DNAstar軟件，分析基因序列間的差異性，先后設(shè)計合成通用引物2對。在通用引物擴(kuò)增區(qū)間內(nèi)，設(shè)計了檢測探針16條，分別是實蠅科通用探針
3、1條，小條實蠅屬通用探針1條，果實蠅屬通用探針1條，桔小實蠅亞屬通用探針1條，地中海實蠅、芒果小條實蠅Ccosary和納塔爾小條實蠅Crosa近緣種探針2條和種特異探針4條，桔小實蠅、木瓜實她papayae、楊桃實衄carambolae、菲律賓實她philippinensis、芒果實衄occipitalis等復(fù)合種探針6條；設(shè)計了質(zhì)控探針3條，分別是定位點(diǎn)探針、陽性質(zhì)控探針和陰性質(zhì)控探針各1條。將探針按照相應(yīng)陣列點(diǎn)樣至醛基化基片，用NANO．PLOTrER2芯片點(diǎn)樣儀分別點(diǎn)樣，制備出地中海實蠅及其近緣種芯片和桔小實蠅復(fù)合種
4、芯片兩種檢測芯片。2．地中海實蠅及其近緣種和桔小實蠅復(fù)合種基因芯片雜交條件的優(yōu)化芯片雜交條件的優(yōu)化主要包括芯片雜交體系模板DNA濃度(O．09ng／／tL，O．18ng／／aL，0．45ng／,uL，0．9ng／,uL)、雜交時間(1h，2h，6h)、雜交液濃度(O．5xSSPE，2％SDS；lxSSPE，2％SDS；5xSSPE，2％SDS；7．5xSSPE，2％SDS10xSSPE，2％SDS；3xBlocking)和雜交溫度(42℃，44℃，46℃)的優(yōu)化。篩選出當(dāng)模板DNA濃度為0．9n幽L；雜交時間3h；雜交液濃
5、度為：10xSSPE，2％SDS；雜交溫度為46℃時，能獲得較好的雜交信號。3．地中海實蠅及其近緣種和桔小實蠅復(fù)合種兩種基因芯片的初步應(yīng)用用制備好的地中海實蠅及其近緣種基因芯片檢測了地中海實蠅(不同蟲態(tài)和地理種)、納塔爾小條實蠅和芒果小條實蠅；用桔小實蠅復(fù)合種基因芯片檢測了楊桃實蠅(不同蟲態(tài))、桔小實蠅、木瓜實蠅、菲律賓實蠅、芒果實蠅，兩種芯片的檢測結(jié)果與常規(guī)形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果完全吻合。結(jié)果表明兩種基因芯片可以作為實蠅快速檢測的一種重要手段。關(guān)鍵詞：實蠅科，地中海實蠅，桔小實蠅，近緣種，復(fù)合種，基因芯片，分類鑒定jnABSTR
6、ACTIdentificationofQuarantinefruitfly(Diptera：Tephritidae)isoneofthemostimportanttechniqueproblemintheinternationalfruitsandvegetabletrade．ThelatestpublishedquarantinelistofChinahasincludeedtheCeratitisMacleayandBactroceraMacqurtasdetrimentalorganisms．Currentmetho
7、dforidentificationoffruitflymainlyba，sedonthemorphologicalmethod．However,itdependsontheexperienceofidentifiersandisrestrainedfromtheshapeandthebreedingperiodoffruitfly．PeRtechniqueisarapid，precisemethodforthedetectionoffruitnv．butcurrentmethodsbasedPeRonlycandetec
8、tonesortoffruitflyeachtime，whichcannotsatisfytheactualapplieddemands．ThisstudyestablishamethodofgenechipfortheidentifyingofCeratitiscapitata，anditsrelat
