實驗二PMSG生物效價測定

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1、實驗二PMSG生物學(xué)效價的測定一．實驗?zāi)康恼莆沼蒙餃y定法測定PMSG的生物學(xué)效價。二．實驗原理PMSG含有FSH、LH成分，因此具有FSH、LH相似的生物學(xué)作用，即能促使性成熟前的小鼠子宮增大、促進(jìn)卵泡發(fā)育、排卵和黃體的形成；對雄性動物具有促進(jìn)精細(xì)管發(fā)育和性細(xì)胞分化。三、測試材料（一）實驗動物：取健康無傷殘的24－28日齡(即將達(dá)到性成熟日齡)、體重12－15g，同源雌幼小鼠。各測試組內(nèi)的實驗鼠出生日齡相差不得超過5天，體重相差不得超過3g。(二)測試樣品：孕馬血清PMSG生物制劑。(三)器械及藥品：1ml注射器、4號

2、針頭、0.1ml微量注射器、1ml和2ml吸管，酒精棉球、生理鹽水、剪子、大號鑷子、帶齒小鑷子、鼠解剖臺(或用小木板及圖釘)、玻璃片(20×30cm)，鼠罐、小玻瓶。四、測試方法（一）測試組的確定：每取0.1ml孕馬血清（0.5IU/μl），按表加入不同量的生理鹽水，稀釋成不同濃度，作為各測試組。（二）對照組：注射生理鹽水。測定的方法：生物測定法、細(xì)胞培養(yǎng)生物測定法、免疫測定法、受體測定法五、檢定方法(一)注射1．注射次數(shù)按各測試組要求，按照稀釋成不同濃度的一定劑量。每個測試組需注射3只雌幼小鼠，孕馬血清只作一次注射。對

3、照組亦為3只雌幼小鼠，在每次給各測試組小鼠注射的同時，注射同樣劑量的生理鹽水。2．注射部位按照各組要求的藥物劑量,準(zhǔn)確地注射于小鼠的皮下,注意不得將藥液注射于胸腔或腹腔內(nèi)，亦不可溢漏于體表。3．劑量每只小鼠注射劑量為0.2ml。4．注射方法用手指捏住小鼠的頭及尾部固定之，以酒精棉球消毒其背部,提起皮膚，將注射針頭平插刺入皮下，將針頭微向上挑起不露出針尖時，再注入藥物。隨著藥物的推入，在皮下可看到鼓起一個小泡，即證實藥物確已注入皮下部位。注射針頭宜選用小號細(xì)針頭,以防止注射后的藥液從針孔處逸出。(二)剖檢1.剖檢時間測試小

4、鼠應(yīng)在注射藥物后的72-78h內(nèi)進(jìn)行。2.剖檢步驟(1)處死小鼠采用頸椎脫臼法處死小鼠。將小鼠頭部固定，用力牽拉鼠尾，可感到頸椎部位脫臼的振動。也可采用將小鼠頭部經(jīng)撞擊致死。然后用圖釘將小鼠呈仰臥姿勢固定于小木板上或鼠解剖臺上。(2)剖腹將處死并固定好的小鼠，沿腹中線剪開腹腔，向前方揭去腸胃內(nèi)臟，即可在腎臟后方看到兩側(cè)呈乳白色的卵巢及與輸尿管相平行的兩子官角。(3)組織剝離將卵巢及子宮周圍的組織剝離，于膀胱后的陰道段剪斷，向上提起即可將子宮及卵巢摘出。(4)剔除附屬組織按各測試組的順序，將摘出的子宮平置于玻璃板上，剔除子

5、宮周圍的附屬組織。為了防止子宮干涸，可滴上數(shù)滴生理鹽水浸潤。(三)效價確定將各測試組雌幼小鼠的子宮與對照組子宮相對比觀察。在每組3只雌幼小鼠中，若有2只鼠的子宮增大一倍者，則確定該組為陽性反應(yīng)組。根據(jù)各測試組中以呈陽性反應(yīng)的最低濃度組的效價值，換算出每毫升孕馬血清中含有的小鼠單位。取最低有效劑量組，將其分母×5，即為1ml血清樣品中含PMSG的小鼠單位數(shù)。表1孕馬血清稀釋倍數(shù)折算鼠單位表組別每0.1ml血清中加入生理鹽水量(ml)稀釋后血清濃度每鼠注射量（ml）注射鼠數(shù)（只）實際鼠體內(nèi)血清量（ml）每ml血清中含有小鼠單

6、位10.91/100.231/505021.21/130.231/656531.51/160.231/808041.81/190.231/959552.11/220.231/11011062.41/250.231/12512572.71/280.231/14014083.01/310.231/15515593.31/340.231/170170103.61/370.231/185185組別每0.1ml血清中加入生理鹽水量(ml)稀釋后血清濃度每鼠注射量（ml）注射鼠數(shù)（只）實際鼠體內(nèi)血清量（ml）陽性小鼠數(shù)量（只）10.

7、91/100.231/5021.51/160.231/8032.11/220.231/11042.71/280.231/14053.31/340.231/1706對照組30動物科學(xué)1001班0.2組別每0.1ml血清中加入生理鹽水量(ml)稀釋后血清濃度每鼠注射量（ml）注射鼠數(shù)（只）實際鼠體內(nèi)血清量（ml）陽性小鼠數(shù)量（只）11.21/130.231/6521.81/190.231/9532.41/250.231/12543.01/310.231/15553.61/370.231/1856對照組3動物科學(xué)1002班0.

8、20六、實驗報告計算出被測樣品中含有的PMSG小鼠單位數(shù)。