資源描述：
《渝動疫控發(fā)〔2011〕35號 附件3》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、附件3：動物結(jié)核病診斷技術(shù)GB/T18645-2002Diagnostictechniquesfortuberculosisofanimal2002-02-19發(fā)布 2002-05-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布221、范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動物結(jié)核病的檢測方法和要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于動物結(jié)核病檢測。2、定義、符號和縮略語本標(biāo)準(zhǔn)采用下列符號和縮略語：PPD：提純蛋白衍生物（purified?protein?derivative）。IU：國際單位（internationalunit）。3、細(xì)菌學(xué)檢查3.1 病料的采集
2、和處理用于細(xì)菌學(xué)檢查的材料采自淋巴結(jié)及其他組織。當(dāng)活畜有可疑的呼吸道結(jié)核、乳房結(jié)核、泌尿生殖道結(jié)核、腸結(jié)核時，其痰、乳、精液、子宮分泌物、尿和糞便可作為細(xì)菌學(xué)檢查的材料。對那些結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗陽性，但尸檢時無病理學(xué)病變的動物，可從下頜、咽后、支氣管、肺（特別是肺門及肺門淋巴結(jié)）、縱隔及一些腸系膜的淋巴結(jié)采集樣品送檢。樣品應(yīng)封裝在無菌的容器內(nèi)冷藏運送。為了提高檢出結(jié)果，樣品可采取消化濃縮法處理，處理方法見附錄A（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。3.1.1痰22對牛?？捎锰颠M行細(xì)菌學(xué)檢驗。?？┨禈O少，宜在清晨采集。用硬橡膠管自口腔
3、伸人至氣管內(nèi)，外端連接注射器吸取痰液。亦可取?？瘸龅募矇K進行檢驗。痰樣品稀薄時，可加人等量的4％～6％硫酸（見附錄A中A3）處理，如痰樣品粘稠時，則加入5倍量的4％硫酸處理。充分搖勻后置37℃作用20min，以3000r／min～4000r／min離心，沉淀物作染色鏡檢、培養(yǎng)和動物試驗。也可用2倍量15％～20％安替福民（antiformin）溶液（見附錄A中A3）處理痰液，將混合物置37℃作用1h～2h后離心。以滅菌生理鹽水沖洗沉淀物幾次后，取沉淀物染色鏡檢、培養(yǎng)和動物試驗?！ ?.1.2乳懷疑有乳房結(jié)核時，可無菌采集乳汁進
4、行檢驗（一般以擠出之最后乳汁含菌量較多，早晨擠出的乳中含菌量最高）。將乳汁分置4～6支離心管中，每管10mL，以3000r／min～4000r／min離心20min～30min，吸取上層乳脂和管底的沉淀物作染色鏡檢、培養(yǎng)和動物試驗。乳汁10mL加酒精和乙醚各10mL及15％～20％安替福民溶液30mL，搖勻置37℃恒溫箱內(nèi)1h～2h，取出加等量滅菌蒸餾水混勻，離心沉淀后棄去上清，取沉淀物作染色鏡檢、培養(yǎng)和動物試驗。3.1.3精液和子宮分泌物在生殖道結(jié)核可疑時，可采集公畜精液、母畜子宮分泌物進行細(xì)菌學(xué)檢查。22處理子宮分泌物，可
5、用15%～20%安替福民溶液，混勻后靜置2h～3h,3000r／min～4000r／min離心20min，棄上清，加10mL，蒸餾水于沉淀物中。即可作動物試驗，經(jīng)1.5～2個月剖檢。3.1.4尿有腎結(jié)核可疑時，可采集尿液，一般采集中段尿液，以早晨第一次尿為宜。如僅作染色鏡檢，可將尿液以3000r／min～4000r／min離心20min后，取沉淀物涂片。如作培養(yǎng)或動物試驗，則應(yīng)將尿液進行消化濃縮處理，再進行檢驗以免雜菌生長而影響檢驗結(jié)果。3.1.5糞便有腸結(jié)核可疑時，可采集糞便進行細(xì)菌學(xué)檢查，患肺結(jié)核的牛只，有時在糞便中亦可檢
6、出結(jié)核分枝桿菌。因牛常將痰液吞咽至消化道中，隨糞便排出。盡量采集混有粘液或膿血的糞便。取糞便30g，加15%～20%安替福民溶液15mL和蒸餾水55mL，混合，經(jīng)2h～3h后，3000r／min～4000r／min離心30min，傾去上清液，加10mL蒸餾水于沉淀物中，將此液用紗布過濾后接種于豚鼠皮下，經(jīng)1.5～2個月后剖檢。22或?qū)⒓S便加2倍量滅菌蒸餾水磨碎，然后加氯化鈉至飽和。當(dāng)液體中殘渣沉淀后（液體完全澄清），浮起的薄膜含有大量的結(jié)核分枝桿菌。取出薄膜，用等量的4%氫氧化鈉（見附錄A中A2）充分混合，置37℃中3h，然后
7、離心，取沉淀物用8%鹽酸中和后，即可作染色鏡檢、培養(yǎng)和動物試驗。糞便中如有粘液或膿血，可挑取粘液膿血選用任何一種消化液處理后檢驗。如系純糞便，取5g～10g，加生理鹽水約3～4倍混合后，用細(xì)銅紗網(wǎng)過濾，取濾液置室溫中自然沉淀，然后取上層懸液置于另一大離心管或燒杯內(nèi)，加消化液約3～4倍量，置37℃溫箱1h～2h，同上法處理后檢驗。3.1.6組織器官盡量采集有結(jié)節(jié)病灶的部位。豬易患頸部淋巴結(jié)結(jié)核、亦易患腸系膜淋巴結(jié)核，且常呈鈣化或干烙樣病變。家禽常在腸、脾、肝發(fā)生結(jié)核病灶，有時亦可見于肺或卵巢。病變組織需先研磨，制成乳劑，通常取組
8、織乳劑或其他液狀病2mL～4mL，加入等量的5%氫氧化鈉溶液，充分振搖5min～10min，或搖至發(fā)生液化為止，液化后經(jīng)3000r／min～4000r／min離心15min～30min，沉淀物加1滴酚紅作指示劑，以2mol/L鹽酸中和至淡紅色后，作染色鏡檢、培養(yǎng)和動物試驗。如
