培養(yǎng)基的配制

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1、實(shí)驗(yàn)五?微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌培養(yǎng)基是將微生物生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成的各種營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基為微生物的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)和生存空間。它具有微生物正常生活所需的各種養(yǎng)料和適宜的環(huán)境條件；（1）適當(dāng)組分和比例的營養(yǎng)物質(zhì)；（2）適宜的pH值；（3）合適的滲透壓；（4）保持無菌狀態(tài)。所以培養(yǎng)基是培養(yǎng)微生物所必需的最主要材料。培養(yǎng)基的配制是微生物學(xué)工作者的主要技術(shù)操作之一。培養(yǎng)基的種類：根據(jù)培養(yǎng)基的組成成分，可將培養(yǎng)基分為三類：合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。半合成培養(yǎng)基：由一部分純化學(xué)物質(zhì)

2、和另一部分天然物質(zhì)配制而成。天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成的。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來分：液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液態(tài)狀培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2％左右的凝固劑的固體狀培養(yǎng)基或固體狀農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.2％-0.5％凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。微生物最常用的凝固劑為瓊脂（其次為明膠），又叫洋菜、凍粉。它不是一種營養(yǎng)物質(zhì)，只能被極少數(shù)種類的細(xì)菌分解利用。瓊脂是從海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。是一種多糖類化合物，主要成分是復(fù)雜的多糖硫酸酯鈣鹽，瓊脂是一種可逆性膠體，在

3、常規(guī)濃度下加熱到96C以上即成溶膠狀態(tài)，融化的瓊脂，當(dāng)溫度下降到42℃以下，又凝固為固體。一、目的要求l.了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。2.了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。3.熟悉分離、培養(yǎng)微生物前的有關(guān)準(zhǔn)備工作及操作方法。二、實(shí)驗(yàn)材料1.藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。2.高壓蒸汽滅菌器、恒溫干熱滅菌箱、細(xì)菌過濾器、紫外線殺菌燈。3.其它：天平、牛角匙、電爐、1NHCl、

4、1NNaOH、pH試紙、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、帶玻璃珠的三角瓶、帶棉塞的無菌試管、無棉塞的空試管、培養(yǎng)血、吸管、各種包裝紙防水紙、繩索、棉花、標(biāo)簽等。三、實(shí)驗(yàn)程序（一）、培養(yǎng)基配制l.培養(yǎng)基配制的一般方法和步驟（1）稱量：按照培養(yǎng)基配方，正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。（2）溶化：在搪瓷杯中加入所需水量（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入蒸餾水或自來水），用玻棒攪勻，加熱溶解。（3）調(diào)pH值（調(diào)pH也可以在加瓊脂后再調(diào)），用1NNaOH或1NHCl調(diào)pH，用pH試紙對照。表6-1瓊脂和明膠的特性比較（4）加瓊脂溶化，在瓊脂溶

5、化過程中，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦，待完全溶化后，補(bǔ)足所失水分，一般數(shù)量少，時間短不必補(bǔ)水。（5）分裝：在漏斗架上分裝。根據(jù)不同的需要進(jìn)行分裝，一般制斜面的裝置為管高的1／5特別注意不要使培養(yǎng)基粘污在管（瓶）口上以免浸濕棉塞，引起污染。（6）包扎成捆、掛上標(biāo)簽。培養(yǎng)基分裝好后，塞上棉塞，用防水紙包扎成捆掛上所配培養(yǎng)基名稱的標(biāo)簽。（7）滅菌備用。滅菌后如需制成斜面的，應(yīng)在下磅后取出，擺成斜面（見圖6-1）。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，如確無菌生長、方可使用。圖6-1滅菌的試管培

6、養(yǎng)基趁熱擺成斜面2．三種培養(yǎng)基的配方及具體配制方法（1）.牛肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌，是一種天然培養(yǎng)基）。配方：牛肉膏3g蛋白胨5g氯化鈉3g瓊脂20g自來水1000mLpH7.2~7.4滅菌l.05kg／cm2，25~30min?本實(shí)驗(yàn)將原配方配成各種濃縮液。各種濃度如下：30％牛肉膏、50％蛋白胨、30％氯化鈉。以配制200mL培養(yǎng)基為例。吸取30％牛肉膏2mL；50％蛋白胨2mL；30％氯化鈉2mL；加入有刻度的搪瓷燒杯中，然后用自來水補(bǔ)足到200mL。用玻棒攪勻，在電爐上稍加熱，調(diào)pH至7.4，加

7、瓊脂4g，加熱熔化，用玻棒不斷攪拌，至瓊脂完全溶解為止，趁熱在漏斗架上裝試管，（見圖6－2）。裝帶有棉塞的無菌試管，裝置1／5的試管高度共12支，作斜面培養(yǎng)基、用鋁殼試管帽的里裝10mL。約試管高度的1／2以上，用作分離時倒平板用。圖6-2分裝培養(yǎng)基圖6-3將培養(yǎng)基試管包扎成捆分裝完畢，以12支為一捆，用防水紙包扎成捆（圖6-3），掛上標(biāo)簽，滅菌備用。（2）.馬鈴薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)真菌之用，是一種半合成培養(yǎng)基）。配方：去皮馬鈴薯（或鮮豆芽）200g蔗糖（或葡萄糖）20g自來水1000

8、mL瓊脂20gpH天然?滅菌（含蔗糖）1.05kg/cm220min（含葡萄糖）0.1kg/cm230min?制備方法配制200mL培養(yǎng)基為例取上皮馬鈴薯40g，切成小塊、放入無刻度的搪瓷杯中，加水200mL，置電爐上加熱煮沸10min，用4層紗布過濾至具刻度的搪瓷杯中，濾液加水補(bǔ)足至200mL。然后加蔗糖4g，加瓊