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《α—半乳糖苷酶發(fā)酵工藝、分離純化及其應用研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、浙江大學生物系統(tǒng)工程與食品科學學院博士學位論文α—半乳糖苷酶發(fā)酵工藝、分離純化及其應用研究姓名：劉彩琴申請學位級別：博士專業(yè)：食品科學指導教師：何國慶20070401逝些厶堂擅主翌位迨窒蟲室摘要量為107．9KDa。純化后0【．半乳糖苷酶的三組分最適作用溫度均為60℃；(]L一半乳糖苷酶三組分的最適作用pH不同，n—galI和d—galIII的最適反應pH為5．0，Ⅱ．gaIⅡ為4．0；就酸堿穩(wěn)定性而言，cc_galI在pH4．0的環(huán)境中最穩(wěn)定(酶活保留率達78．9％)，0L—galII在pH6．0的
2、環(huán)境中最穩(wěn)定(酶活保留率達73．7％)，0【．gal111在pH5．0的環(huán)境中最穩(wěn)定(酶活保留率達88．4％)。(6)不同金屬離子和糖類等對0【．半乳糖苷酶三組分酶活的影響是不同的：三組分均受A礦強烈抑制，Cu2+對d—galI和0【-g甜III有明顯的抑制作用，而對僅一galII有激活作用。ca2’、M92+、K+和Na+對0【-galI酶活的影響不大，Mn2+離子有激活作用；Ca2+、M92中、Zn2+和Mn2+對旺-galII有激活作用，e和Na+有抑制作用：Ca2+、Zn¨和K+對a．galI
3、II酶活的影響不大，Mg”、Mn2+和Na+離子有激活作用。SDS對a一半乳糖苛酶a唱alI和d-galIII有明顯的抑制作用，而對q．galII影響較小，EDTA、乳糖、棉籽糖對三組分均有抑制作用，海藻糖、甘露糖、CaCl·2H20和巰基乙醇對a-galI和0【一galII均有抑制作用，而對d—galTII組分幾乎無影響。(7)ol—galI對對硝基．旺一D一半乳糖苷的米氏常數(shù)Km=9．39mmol／L，對水蘇糖的Km=12．79mmol／L，對棉籽糖的Krn=4．79mmol／L，對蜜二糖的Km=
4、1．03mmol／L；c【．galII對對硝基一n—D-半乳糖營的米氏常數(shù)Kin=6．54mmol／L，對水蘇糖的Km=2．39mmol／L，對棉籽糖的Km=11．38mmol／L，對蜜二糖的Km=2．02mmol／L；c【．gallII肘對硝基．Ⅱ．D一半乳糖苷的米氏常數(shù)Krn=8．24mmol／L，對水蘇糖的Km=9．98mmol／L，對棉籽糖的Km=4．33mmol／L，對蜜二糖的Kin=3．18mmol／L。(8)甘露醇、海藻糖和棉籽糖對c【一半乳糖苷酶粗酶液熱穩(wěn)定性有較好的保護作用。采用『F
5、交實驗設計獲得了復合保護劑配方為：1．75mmol／L的海藻糖，1．5mmol／L的甘露醇和2mmol／L的棉籽糖。復合保護劑的添加能使a．半乳糖苷酶在30℃～60。C范圍內(nèi)的酶活保留率提高11．6％～21．7％，28。C存放24h，該酶在試{3．0的環(huán)境中保健d52％的活性。u一半乳糖苷酶在28℃、36．2℃和45℃下貯存，酶活損失50％的時間分別為：液體酶對照組51．90、28．13和7．31天；液體酶處理組：97．11、40．685n7．49天，而固體a．半乳糖苷酶損失50％所需時間分別為：88
6、．54、24．475L18．78天。(9)純化后的Ⅱ-半乳糖苷酶0【一galI、“一galII和0【一galIⅡ均能水解豆粕乳、棉籽粕乳和菜籽粕乳中的水蘇糖、棉籽糖等寡糖。a—galI、0【一galII和c【一galIII均能水解豆粕乳中水蘇糖和棉籽糖。旺一galII對水蘇糖的水解能力大于旺一galI和n—galIII，50。C比40。C更易使豆粕乳中水蘇糖游離出。40。C和50。C水浴溫度下，反應1～5h，cl—galII對豆粕乳中棉籽糖的水解率達100％；n—galI和a—galIII對棉籽糖的水
7、解能力較弱，50。C比40。C更有利于棉籽糖的生成。cc—galI、旺一galII和a-galⅢ對棉籽粕乳具有水解作用。Ⅱ-galII對水蘇糖的水解能力比VI逝迤厶堂壤±堂位絲毫——蟲噩擅耍cl-galI、cc-galIII高。c【嘻a111對棉籽糖的水解能力最強，40。C時反應3h，水解率達99．9％。其次是c【一galIII，其對棉籽糖的水解率在40。C時以3h最高，為43．3％，50℃時4h最高，為84．71％。0t-gaII對棉籽糖的水解能力較弱。Ⅱ一galI、o【一galII和0【一galI
8、Ⅱ對菜籽粕乳有水解作用。其中，Ⅱ-galIⅡ對水蘇糖的水解能力最強；在40℃和50。C水浴溫度下，水蘇糖的水解率為100％。40。C時，u．galH作用3h，而50。C作用2h，水蘇糖完全被酶解；u—galI對水蘇糖的水解能力較弱，與50℃相比，40。C更不利于水解。40。C時，0l嚕alI作用1h，可將棉籽糖幾乎完全水解：而0【一galIl和仳一gal111對棉籽糖的水解能力弱。50。C時，三者對棉籽糖的水解能力均很弱。(10)固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)的旺一半乳
