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1、第九章離子交換層析法儀器設(shè)備簡介離子交換全套裝置第九章離子交換層析第一節(jié)離子交換層析基本原理第二節(jié)離子交換劑的分類與性質(zhì)第三節(jié)離子交換劑與緩沖液的選擇第四節(jié)離子交換拄層析操作方法第五節(jié)離子交換拄層析應(yīng)用第一節(jié)離子交換層析基本原理一、離子交換劑的組成結(jié)構(gòu)及其的特性二、離子交換劑的選擇性三、離子交換柱層析原理示意圖一、離子交換劑的組成結(jié)構(gòu)及其特性基質(zhì)電荷基團(tuán)反離子商品名纖維素—O—CH2——COO-·Na+CM-纖維素纖維素-O-(CH2)2-N+H(C2H5)2·Cl-DEAE-纖維素聚苯乙烯—————SO3-·Na+732陽離子樹脂
2、聚苯乙烯——N+(CH2)4·Cl-717陰離子樹脂聚苯乙烯磺酸型陽離子交換樹脂的制備離子交換樹脂的形狀結(jié)構(gòu)示意圖二、離子交換劑的選擇性1、平衡常數(shù)2、選擇性與離子的電荷及水合離子半徑的關(guān)系3、離子濃度對選擇性的影響4、兩性物質(zhì)的選擇性1、平衡常數(shù)值反映離子交換劑對不同離子的結(jié)合力或選擇性,稱為選擇系數(shù),此外平衡的移動遵循質(zhì)量作用定律若KBA值>1,即[RB]>[RA],若KBA值=1,即[RB]=[RA],若KBA值<1,即[RB]<[RA],RA+B+RB+A+2、選擇性與離子的電荷及水合離子半徑的關(guān)系離子交換劑與各種水合離子
3、的結(jié)合力是與離子的電荷量成正比,而與水合離子半徑的平方成反比。一價離子:Li+<Na+<K+<Rb+<Cs+二價離子:Mg2+<Ca2+<Sr2+<Ba2+一價陰離子:F-<Cl-<Br-<I-不同價陽離子:Na+<Ca2+<Al3+<Ti4+磺酸基樹脂和季胺基樹脂對各種離子的相對選擇系數(shù)陽離子樹脂陰離子樹脂反離子相對選擇系數(shù)反離子相對選擇系數(shù)H+Na+NH4+K+Mn2+Mg2+Fe2+1.01.51.952.52.352.52.55OH-檸檬酸乙酸Cl-HCO-HPO-苯1.02203.2226.05.5500三、離子交換柱層
4、析原理示意圖動畫按鈕第二節(jié)離子交換劑的分類及性質(zhì)一、離子交換劑分類二、離子交換劑性質(zhì)一、離子交換劑分類1.疏水性2.親水性(1)陽離子交換劑(2)陰離子交換劑(1)纖維素離子交換劑(2)交聯(lián)葡聚糖離子交換劑(3)瓊脂糖離子交換劑1.疏水性離子交換劑R-SO-3H+Na+===R-SO3Na+H+R-PO(OH)2+Na+===R-POOHONa+H+R-N+(CH3)3OH-+Cl-==R-N+(CH3)3·Cl-+OH-R-N+(CH3)2OH-+H2O==R-N+(CH3)2H·OH-R-N+(CH3)2H·OH-+Cl-=R-
5、N+(CH3)2H·Cl+OH-陰離子交換劑陽離子交換劑2.親水性離子交換劑磷酸纖維素CM-纖維素DEAE-纖維素CM-交聯(lián)葡聚糖DEAE-交聯(lián)葡聚糖CM-SepharoseCL-6B二、離子交換劑性質(zhì)顏色與形狀交聯(lián)度吸水量或膨脹度交換容量穩(wěn)定性比重交換容量交換容量:是指離子交換劑與溶液中離子或離子化合物進(jìn)行交換的能力。(mg/g或mmol/g、mg/ml或mmol/ml)交換容量的測定:強(qiáng)酸型與強(qiáng)堿型測定其解離鹽的能力;弱酸型與弱堿型測定其中和酸堿的能力。影響交換容量的因素:篩孔、離子強(qiáng)度、pH值。強(qiáng)酸型陽離子交換介質(zhì)交換容量的
6、測定法取一定量的離子交換介質(zhì),去離子水溶脹,漂洗干凈用1mol/L的NaOH處理,去離子水洗至中性,1mol/L的HCl處理,去離子水洗至中性。然后用1mol/L的NaCl洗脫,收集洗脫液,再通過已標(biāo)定的NaOH滴定洗脫液中的氫離子濃度,計算出吸附氫離子的毫摩爾數(shù)量,除以離子交換介質(zhì)的質(zhì)量,即可得到交換容量。計算公式如下:強(qiáng)堿型陰離子交換介質(zhì)交換容量的測定方法取一定量的離子交換介質(zhì),去離子水溶脹,漂洗干凈,用1mol/L的HCl處理,去離子水洗至中性,1mol/L的NaOH處理,去離子水洗至中性。然后用1mol/L的NaCl洗脫,
7、收集洗脫液,再通過已標(biāo)定的HCl滴定洗脫液中的氫氧根離子濃度,計算出吸附氫氧根離子的毫摩爾數(shù)量,除以離子交換介質(zhì)的質(zhì)量即可得到交換容量。計算公式如下:凝膠或纖維類弱堿型陰離子或弱酸性陽離子交換介質(zhì)換容量的測定方法取一定量的離子交換介質(zhì),漂洗干凈,用1mol/L的NaCl處理,去離子水洗至中性,緩沖液平衡,用已知蛋白的濃度樣品過柱吸附,直至柱內(nèi)的介質(zhì)吸附的量達(dá)到飽和。用一定濃度的NaCl或其他的洗脫劑洗脫,收集洗脫液,測定洗脫液中的蛋白質(zhì)的濃度,按如下計算公式交換容量。第三節(jié)離子交換劑與緩沖液的選擇一、離子交換劑的選擇二、緩沖液的選擇
8、一、離子交換劑的選擇必須考慮的影響因素1.陰、陽離子交換劑的選擇2.強(qiáng)、弱離子交換劑的選擇3.不同離子型交換劑的選擇4.不同基質(zhì)離子交換劑的選擇必須考慮的因素①要求高度的不溶性和疏松的多孔結(jié)構(gòu)或巨大的表面積,較多的交換基團(tuán)和穩(wěn)定的物理