GB15193.6-2003 哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn).pdf

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1、ICS07.100C53中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15193.6-2003代替GB15193.6-1994A甫乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)Mammalianbonemarrowcellchromosomeaberrationtest2003-09-24發(fā)布2004-05-01實(shí)施中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)GB15193.6-2003前言本標(biāo)準(zhǔn)全文強(qiáng)制本標(biāo)準(zhǔn)代替GB15193.6-1994《骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)》本標(biāo)準(zhǔn)與GB15193.6-1994相比的主要修改如下:—將標(biāo)準(zhǔn)名稱“骨髓

2、細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)”改為“哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)”;—在“范圍”中增加了受試物的具體內(nèi)容:食品生產(chǎn)、加工、保藏、運(yùn)輸和銷售過程中所涉及的可能對(duì)健康造成危害的化學(xué)、生物和物理因素，檢驗(yàn)對(duì)象包括食品添加劑(含營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑)、食品新資源及其成分、新資源食品、輻照食品、食品容器與包裝材料、食品工具、設(shè)備、洗滌劑、消毒劑、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、食品工業(yè)用微生物等;增加不適用范圍;—將原操作步驟中“5.1動(dòng)物處理”標(biāo)題下的有關(guān)內(nèi)容分列為“試驗(yàn)動(dòng)物”、“劑量及分組”和“操作步驟”三章;—增加章題“試驗(yàn)動(dòng)物”，將“取健

3、康成年大、小鼠”改為“常用健康年輕的成年大鼠或小鼠”;—增加章題“劑量及分組”，并將高劑量組的設(shè)計(jì)方法增加一條“急性毒性試驗(yàn)給予受試物最大劑量(最大使用濃度和最大灌胃容量)求不出LDs。時(shí)高劑量組則按以下順序a)10g/kg體重;b)人的可能攝人量的10。倍;或c一次最大灌胃劉量進(jìn)行設(shè)計(jì)”;增加參考陽性對(duì)照物“絲裂霉素CO.5mg/kg體重~2.0mg/kg體重)，或環(huán)磷酞胺(40mg/kg體重)”;—將原"5.1.2”劑量設(shè)計(jì)以外的內(nèi)容放在增加的“操作步驟”標(biāo)題下，并在此標(biāo)題下增加“受試物配制”的有關(guān)內(nèi)容

4、;—增加“結(jié)果判定”內(nèi)容自本標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施之日起，GB15193.6-1994同時(shí)廢止。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與食品安全所、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)、杭州市衛(wèi)生防疫站。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:韓馳、唐玲光、袁振華。本標(biāo)準(zhǔn)于1994年首次發(fā)布，本次為第一次修訂。GB15193.6-2003哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了哺乳動(dòng)物骨1im染色體畸變?cè)囼?yàn)的基本技術(shù)要求本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)價(jià)食品生產(chǎn)、加工、保藏、運(yùn)輸和銷售過程中所涉及的可能對(duì)健康造成危害的化學(xué)、生物和物理因

5、素對(duì)大、小鼠骨髓細(xì)胞的遺傳毒性，檢驗(yàn)對(duì)象包括食品添加劑(含營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑)、食品新資源及其成分、新資源食品、輻照食品、食品容器與包裝材料、食品工具、設(shè)備、洗滌劑、消毒劑、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、食品工業(yè)用微生物等本標(biāo)準(zhǔn)不適用于有證據(jù)表明受試物或反應(yīng)代謝產(chǎn)物達(dá)不到靶組織(targettissue)-骨髓的情況，2原理染色體是細(xì)胞核中具有特殊結(jié)構(gòu)和遺傳功能的小體，當(dāng)化學(xué)物質(zhì)作用于細(xì)胞周期G1期和s期時(shí)，誘發(fā)染色體型畸變，而作用于G2期時(shí)則誘發(fā)染色體單體型畸變。給試驗(yàn)的大、小鼠腹腔注人秋水仙素，抑制細(xì)胞分裂時(shí)紡錘體的形成

6、，以便增加中期分裂相細(xì)胞的比例，并使染色體絲縮知、分散，輪廓清晰.在顯微鏡下觀察染色體數(shù)口和形態(tài)3儀器與試劑全部試劑除注明外均為分析純，試驗(yàn)用水為燕餾水3.10.1%秋水仙素:笠于棕色瓶中，冰箱保存3.22.2%檸檬酸鈉3.3pH7.4磷酸鹽緩沖液3.3.11/15mol/L磷酸氫二鈉溶液磷酸氫二鈉(NaeHPO,A47g溶于1000mL蒸餾水中3.3.21/15mol/L磷酸二氫鉀溶液:磷酸二氫鉀(KH.,PO,)49.07g溶于1000m1-燕餾水中3.3.3將磷酸氫二鈉溶液80ml與磷酸二氫鉀溶液20

7、mL混合，用pH計(jì)測(cè)定并調(diào)節(jié)pFI至7.43.40.075mol/L氯化鉀溶液。3.5甲醇(分析純):冰乙酸(分析純)以3，1混合，臨用時(shí)現(xiàn)配3.6Giemsa溶液3.6.1Giemsa儲(chǔ)備液:取Giemsa染料3.8g,置瑪瑙乳缽中，加少量甲醇研磨，逐漸加甲醇至375mL溶解后再加125mL純甘油，于370C溫箱保溫48h在此期間搖動(dòng)數(shù)次放置1周-2周過濾備用3.6.2Giemsa應(yīng)用液:取1m工儲(chǔ)備液加入10,LpH7.4磷酸緩沖液374V器與設(shè)各寒盼室常用設(shè)備、恒溫水洛鍋(37℃士50C),離心機(jī)、生

8、物顯微鏡，4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用健康年輕的成年大鼠或小鼠。每組用兩種性別的動(dòng)物至少各5只。動(dòng)物購(gòu)買后適應(yīng)環(huán)境至少3天5荊量及分組受試物應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組，最高劑量組原則上為動(dòng)物出現(xiàn)嚴(yán)重中毒表現(xiàn)和/或個(gè)別動(dòng)物出現(xiàn)死亡的劑量，一般可取工/2LD,，低劑量組應(yīng)不表現(xiàn)出毒性，分別取1/4和1/8LD。作為中、低劑量急性毒性試驗(yàn)給予受試物最大劑量(最大使用濃度和最大灌胃容量)動(dòng)物無死亡而求不出LD。時(shí)，高劑量組則按以51GB15193