燈盞花根腐病

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1、英特爾大書(shū)房開(kāi)啟一站式檢索時(shí)代大數(shù)據(jù)（BigData）云計(jì)算（Cloud）移動(dòng)性（Mobility）其他（Others）8期杜賓等：云南燈盞花根腐病病原初步鑒定1831南和廣西等高山和亞高山開(kāi)闊山坡草地和林緣地區(qū)。始載于《滇南本草》[1]，民間的使用已有600年的歷史。性味辛、微苦、溫，具有散寒解表，祛風(fēng)除濕，活絡(luò)止痛的作用?？梢砸种频鞍准っ福玫募せ?，防治神經(jīng)元缺血性損失。通過(guò)降低缺血腦組織內(nèi)中性粒細(xì)胞的粘附浸潤(rùn)對(duì)腦缺血有保護(hù)作用。燈盞花制劑自20世紀(jì)70年代開(kāi)始應(yīng)用于臨床上，主要用于治療高血壓、腦栓塞、多發(fā)性神經(jīng)炎、慢性視網(wǎng)膜炎及意外所致的癱瘓癥，被臨床稱為“腦血管疾病的

2、特效藥”，1977年被列入《中華人民共和國(guó)藥典》中，是云南省“十五”期間重點(diǎn)培育的五大“云藥”系列特色產(chǎn)品之一。燈盞花原為野生，隨著市場(chǎng)對(duì)燈盞花及其制劑需求量的劇增和可觀的經(jīng)濟(jì)效益，近年來(lái)開(kāi)始了人工大面積栽培[2~6]。但是隨著燈盞花人工栽培規(guī)模的不斷擴(kuò)大，根腐病的危害也逐年加重，已經(jīng)成為制約其大規(guī)模生產(chǎn)的主要因素之一?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】該病害目前在國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。【本研究的切入點(diǎn)】確定引起燈盞花根腐病的病原物，為制定高效、安全的防治措施提供依據(jù)。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】通過(guò)對(duì)燈盞花根腐病的癥狀進(jìn)行觀察、描述，對(duì)其病原物進(jìn)行分離、培養(yǎng)和鑒定。1材料與方法1.1供試燈盞花種源云南

3、生物谷燈盞花藥業(yè)有限公司昆明栽培基地種植的燈盞花，是從云南省文山州邱北縣采集，經(jīng)過(guò)3年馴化栽培的種源。1.2病原菌的分離采集發(fā)病燈盞花植株的根，從病健交界處切取長(zhǎng)約2～3mm的一段，用75%的酒精浸泡5～6s，再在0.1%的酸性升汞溶液中處理3～5s，然后在滅菌水中漂洗3次，將其移置在馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（PDA）上培養(yǎng)，挑取所出現(xiàn)的菌落移置在斜面PDA培養(yǎng)基上，然后在顯微鏡下進(jìn)行單孢分離，保存?zhèn)溆肹7]。1.3病原菌的鑒定將單孢分離物在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到其純培養(yǎng)物。觀察其在PDA培養(yǎng)基上的培養(yǎng)性狀、質(zhì)地、色澤等。在顯微鏡下觀察檢測(cè)，測(cè)量大、小兩型分生孢子的形態(tài)、大小、分隔

4、數(shù)和產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)，以及厚垣孢子的有無(wú)、形態(tài)和著生方式。1.4田間接種在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)農(nóng)場(chǎng)種植燈盞花，分布在3個(gè)不同試驗(yàn)點(diǎn)，每點(diǎn)1500株苗。用無(wú)菌水沖洗培養(yǎng)7d的菌落，制成孢子懸浮液（5×106個(gè)孢子/ml）。灌根前用剪刀刺破健康植株的根部，每株澆灌10ml孢子懸浮液。每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)隨機(jī)接種5株，3個(gè)點(diǎn)共接種15株。每個(gè)點(diǎn)隨機(jī)取5株采用同樣的方法灌入清水，作為對(duì)照。接種的燈盞花均為生長(zhǎng)健康旺盛的植株。1.5接種后病情調(diào)查接種14d后，將接種植株及對(duì)照全部挖出，用自來(lái)水將根部的泥土沖干凈后，按以下分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)記載發(fā)病情況：0級(jí)：根系健康，完全無(wú)病；1級(jí)：僅有少許根系受傷，枯死面積小于1

5、0%；3級(jí)：根系受傷明顯，枯死面積小于25%；5級(jí)：根系枯死面積25%～50%；7級(jí)：根系枯死面積50%～75%；9級(jí)：根系枯死面積大于75%。1.6致病菌的再分離取接種發(fā)病的燈盞花植株的根部，按照1.2的方法分離病原物，在PDA培養(yǎng)平板上獲得純培養(yǎng)，并與原接種菌株相比較。2結(jié)果與分析2.1燈盞花根腐病癥狀描述該病原菌主要侵染燈盞花的根部和莖基部，發(fā)病初期植株地上部分不表現(xiàn)任何癥狀，但隨著病情的發(fā)展，維管束被破壞，失去輸水功能，開(kāi)始時(shí)葉片在中午陽(yáng)光強(qiáng)烈時(shí)萎蔫，晚上即可恢復(fù)，以后便漸漸萎蔫死亡，最終導(dǎo)致整株干枯。觀察發(fā)病植株的根部，已部分或完全變成深黑褐色（圖1），用刀片切開(kāi)

6、，可以明顯看到其維管束組織變?yōu)楹诤稚?.2接種結(jié)果接種的15株燈盞花植株中，根部全部出現(xiàn)腐爛癥狀，其中嚴(yán)重度為1級(jí)的有4株，3級(jí)的有3株，5級(jí)的有4株，7級(jí)的有2株，9級(jí)的有2株，發(fā)病率達(dá)100%。對(duì)照植株的根部生長(zhǎng)健康，發(fā)病率為0（表1，圖2）。2.3病原菌的鑒定分離得到的單個(gè)分生孢子在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)四天后，菌落直徑是3.54cm（pH6.5，27℃），初生為白色，后為紅色和紅褐色，氣生菌絲發(fā)達(dá)，棉絮狀。無(wú)性繁殖產(chǎn)生大、小兩型分生孢子，大型分生孢子較少，5～8d產(chǎn)生，鐮刀狀，1～3個(gè)分隔，39～51×4～5.2μm；小型分生孢子1～2d就可以產(chǎn)生，并且產(chǎn)生1832中國(guó)

7、農(nóng)業(yè)科學(xué)40卷a：健康植株地上部分；b：發(fā)病初期地上部分；c：發(fā)病后期地上部分；d：左發(fā)病后期根部；右健康植株根部a:Leafofhealthyplant;b:Leafofsickplantinearlyperiod;c:Leafofsickplantinlaterperiod;d:Left:Rootofsickplant;Right:Rootofhealthplant圖1燈盞花根腐病田間自然發(fā)病癥狀Fig.1SymptomofE.brevlscapusrootrotinfield表1接種后14d燈盞花根腐病的發(fā)病