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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)分子植物育種，2010年，第8卷，第4期，第725—729頁(yè)MolecularPlantBreeding,2010，V01．8，No．4，725—729研究報(bào)告ALetter高羊茅屁吼如J啟動(dòng)子的克隆及其與gus基因融合表達(dá)載體的構(gòu)建王健l安康學(xué)院農(nóng)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，安康，725000；2西北大學(xué)西部資源和生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，西安，710069通訊郵件，waagiiaaswj@163．tom摘要本研究以獲得的凡饑豇J基因eDNA序列設(shè)計(jì)引物，采用染色體步移技術(shù)從高羊茅基因組中分離了一段FaChitl基因啟動(dòng)
2、子區(qū)域。序列分析結(jié)果顯示，該啟動(dòng)子長(zhǎng)度為935bp，含有保守性元件TATA和CAAT．Box，以及與植物逆境脅迫應(yīng)答相關(guān)的多個(gè)順式作用元件，如W-box、ABRE、MYB及MYC轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)等。另外構(gòu)建了含不同長(zhǎng)度觚矗J啟動(dòng)子區(qū)域(-935bp、一65lbp、一233bp)與舭s基因融合植物表達(dá)載體，分別命名為pFaChitlP—I、pFaChitIP-Ⅱ和pFaChitlP—m，為進(jìn)一步進(jìn)行該啟動(dòng)子的功能分析奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞高羊茅，F(xiàn)aChitl基因，啟動(dòng)子克隆，gus基因Cloningof屁劬如JPromoter
3、fromTallFescueandConstructionofthePro—moter-gusExpressionVectors脅盯gJian1CollegeofAgricultureandLifeSciences,AnKangUniversity,Ankang,725000；2KeyLaboratoryofResourceBiologyandBiotechnologyinWesternChina(MinistryofEducation),InstituteofLifeScienceNorthwestUniversity
4、,Xi’an,710069Correspondingmail，wangiianswj@163．cornIX)l：10．3969／mpb．008．000725AbstractAccordingtothesequenceoftheFaChitlgenefragmentobtained，weisolatedFaChitlgenepromoterregionfromtallfescue(Festucaarundinace動(dòng)genomicDNAusinggenomewalkingmethod．Sequenceanalysisre-
5、vealedthattheFaChitlpromoterregionwas935bplongandcontainedbothtypicalTATAandCAATboxes．a(chǎn)swellasseveralpotentialcis-actingelementsrelatedtoplantstressresponses，suchasW—box，ABRE，MYBandMYCtranscriptionfactorbindingsites．Furthermore，Wehaveconstructedthreepromoter-guse
6、xpressionvectorswithdifferentpromoterdeletions(-935bp，一651bp，一233bp)inthisresearch，designatedaspFaChitlP—I，pFaChitlP—IIandpFaChitIP一Ⅲ，respectively，whichlaidthebasisforfurtherinvestigatingthefunctionof肛Chitlgenepromoter．KeywordsTallfescue(Festucaarundinace曲，F(xiàn)aChit
7、lgene，Promotercloning，gus啟動(dòng)子是一段能與RNA聚合酶及其它轉(zhuǎn)錄因子特異性結(jié)合、決定基因轉(zhuǎn)錄起始的DNA片段。目前，基因工程中所采用的大多為組成型啟動(dòng)子，在其啟動(dòng)下抗逆基因的持續(xù)強(qiáng)表達(dá)雖然可以提高植物的抗逆能力，但可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)化植株異常發(fā)育的情況。相反，脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)予則不會(huì)出現(xiàn)上述情況，因?yàn)橹挥性谀婢趁{迫時(shí)外源抗性基因才得以誘導(dǎo)表達(dá)(CurtandRushton，2005)。因此分離與弄清楚植物啟動(dòng)子的分子本質(zhì)不僅是研究基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制的重要內(nèi)容，而且也是構(gòu)建基因工程表達(dá)載體的關(guān)鍵。WWW．mol
8、plantbre圮d．org／d0V10．3969／mpb．008．000725植物病源相關(guān)基因肩動(dòng)子中包含多種在抗病反應(yīng)中起重要的順式作用元件，其中包括受多種不同病原菌誘導(dǎo)的GCC．box(AGCCGCC)(Zhoueta1．．1997；Dubouzeteta1．，2003)；受創(chuàng)傷及部分病原誘導(dǎo)的W-box[(T
