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《人lifnt--3基因克隆及其雙基因載體構(gòu)建和表達(dá)的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、單位代碼：10472學(xué)號(hào)：1l17002中圖分類號(hào)：Q28密級(jí)：公開(kāi)拓浙囂茅繞碩士學(xué)位論文人LIF／NT-3基因克隆及其雙基因載體構(gòu)建和表達(dá)的研究TheStudyonCloningofHumanLIF／NT-3GenesanditsDualGeneVectorConstructionandExpression年級(jí)三Q二二級(jí)TheStudyonCloningofHumanLIF／NT-3GenesanditsDualGeneVectorConstructionandExpressionAThesisSubmittedfor
2、theDegreeofMasterCandidate：LiWeidongSupervisor：Prof．FengHuigengSchoolofLifeSciencesandTechnologyXinxiangMedicalUniversity新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律
3、后果由本人承擔(dān)。作者簽名：日期：伽J怍6月f日，學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于(請(qǐng)?jiān)谝韵孪鄳?yīng)方框內(nèi)打“√”)：1．保密口，在一年解密后適用本授權(quán)書。2．不保密口。儲(chǔ)虢磨嘴、眺Ⅶ嘛易月f日導(dǎo)師簽名：期：伽l夠年6月1日目錄摘要??????????????
4、????????????????????1材料和方法???????????????????????????????9結(jié)果????????????????????????????????????????????．31討{侖????????????????????????????????????????????．47參考文獻(xiàn)???????????????????????????????．51綜述：干細(xì)胞治療脊髓損傷的研究進(jìn)展??????????????????．56攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況??????????????????
5、?????．68致謝?????????????????????????????????．69個(gè)人簡(jiǎn)歷???????????????????????????????．70新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人LIF／NT-3基因克隆及其雙基因載體構(gòu)建和表達(dá)的研究摘要背景脊髓損傷(Spinalcordinjury,SCI)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的嚴(yán)重創(chuàng)傷，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Humanumbilcalcordstemcell，HUC．MSCs)對(duì)SCI的治療有一定的效果。有研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子一3(Neurotrophinfactor-3，NT
6、-3)與白血病抑制因子(Leukemiainhibitoryfactor,LIF)基因?qū)ι窠?jīng)系統(tǒng)有修復(fù)創(chuàng)傷和維持神經(jīng)元生存的作用。因此，LIF／NT-3雙基因載體復(fù)合HUC．MSCs，能否增強(qiáng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的治療效果是需深入探索的重要臨床課題。目的本研究旨在通過(guò)克隆人LIF與NT-3基因，構(gòu)建LIF．IRES．NT-3雙基因載體并整合到HUC—MSCs基因組中，獲得過(guò)表達(dá)LIF和NT-3基因的HUC．MSCs，為干細(xì)胞移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病特別是脊髓損傷提供新的思路。方法1．以人血液?jiǎn)魏思?xì)胞來(lái)源的人基因組DNA為模板
7、，利用重疊PCR和姊妹PCR技術(shù)克隆人LIF和NT-3基因。2．利用基因工程技術(shù)，構(gòu)建plRES2-LIF-EGFP和plRES2-LIF．IRES-NT-3真核表達(dá)載體。3．將篩選出的陽(yáng)性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)mRNA、蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。4．利用基因工程技術(shù)，獲取LIF和LIF．IRES-NT-3基因片段，構(gòu)建pCDH．LIF和pCDH．LIF．IRES—NT-3質(zhì)粒。5．將構(gòu)建的pCDH．LIF和pCDH．LIF—IRES-NT-3重組質(zhì)粒與慢病毒包裝質(zhì)粒pVSVG、A8
8、．91共轉(zhuǎn)染HEK293FT細(xì)胞，收集慢病毒上清，濃縮后將獲得的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染HEK293FT細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)mRNA、蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。新鄉(xiāng)醫(yī)!學(xué)院碩j仁學(xué)位論文6．將鑒定過(guò)的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染HUC．MSCs，檢測(cè)LIF和NT-3基因mRNA的表達(dá)。結(jié)果1．成功克隆人LIF和NT-3基因
