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《產(chǎn)脂肪酶真菌的篩選》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、脂肪酶產(chǎn)生細菌的篩選鞏素絹（河北農(nóng)業(yè)大學生命科學學院微生物與生化藥學，河北保定071001）摘要：從富含油脂的土壤中尋找高產(chǎn)脂肪酶的真菌，以期為擴大脂肪酶的菌源提供材料。本試驗從保定市煉油廠附近土樣中，經(jīng)富集培養(yǎng)、平板篩選得到22株脂肪酶產(chǎn)生菌株，通過復篩得到1株脂肪酶活力較高真菌。為脂肪酶產(chǎn)生菌以及脂肪酶的工業(yè)化生產(chǎn)與應用奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：脂肪酶；篩選；真菌Abstract：Thestudyaimedtoseekforthefungiwithhighyieldoflipasefromthegreasysoil，soastoprov
2、idethematerialforexpandingthefungisourceoflipase.22strainsoffungiproducinglipasewereisolatedbyenrichmentcultureandflatscreeningmethodsinsoilsamplescollectedfromtherefineryofBaoding．Astainwithhigheractivityofproducinglipasewasisolatedbyre-screeningmethods.Thestudylaidafo
3、undationforlipaseproducingbacteriaandindustrialproductionandapplicationoflipasetosomeextent．Keywords:Lipase;Screening;fungi前言脂肪酶(Lipase，E.C.3.1.1.3，甘油三酯水解酶)，可在油水界面催化甘油三酯形成甘油二酯、甘油單酯或甘油及游離脂肪酸［1］。微生物脂肪酶比動物脂肪酶酶解作用的pH和溫度范圍更寬，便于工業(yè)化生產(chǎn)獲得高純度酶制劑［2］。脂肪酶在微生物界分布很廣，據(jù)不完全統(tǒng)計，目前已有65個屬的微生
4、物能夠產(chǎn)生脂肪酶［3］。隨著對微生物脂肪酶研究的深入，已發(fā)現(xiàn)多種具有不同的酶學性質(zhì)和底物特異性的微生物脂肪酶，其在水解、酯化、轉(zhuǎn)酯及酯類手性合成等反應中都表現(xiàn)出較好的應用前景［4］。就微生物脂肪酶而言，雖然在產(chǎn)酶菌株選育、培養(yǎng)條件、酶的性質(zhì)及工業(yè)應用上已進行了多年研究，但由于脂肪酶的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的多樣性、酶的不穩(wěn)定性、底物的水不溶性、酶的來源不足、提純困難和應用范圍不廣泛等問題，脂肪酶的研究進展及工業(yè)應用與蛋白酶、淀粉酶相比要慢得多，窄得多［5］。國內(nèi)，脂肪酶的研究與開發(fā)曾被連續(xù)列為3個“五年”攻關(guān)項目，但目前對脂肪酶制劑的需求仍主要依
5、賴進口［6］。因此，該研究擬通過初篩和復篩從富含油脂的土壤中尋找高產(chǎn)脂肪酶的真菌，以期為擴大脂肪酶的菌源提供材料。1材料與方法1.1樣品1.1.1供試土樣8個土樣分別采自保定市周邊植物油廠、餐廳、菜市場、屠宰場等周圍富含油脂的土壤。1.1.2試劑聚乙烯醇（PVA，聚合度1750±50）購自天津市化學試劑三廠；橄欖油購自上海醫(yī)藥（集團）上?；瘜W試劑公司；其他生化試劑或化學試劑均為進口或國產(chǎn)分析純。1.1.3培養(yǎng)基富集培養(yǎng)基：每升含0.5g(NH4)2SO4，0.1gNH4NO3，0.1gNaCl，0.1gMgSO4·7H2O，0.5gK
6、2HPO4，0.1gFeSO4·7H2O，10mL橄欖油，用0.1mol/LNaOH調(diào)pH8.0。初篩培養(yǎng)基：每升含0.5g(NH4)2SO4，0.1gNH4NO3，0.1gNaCl，0.1gMgSO4·7H2O，0.5gK2HPO4，0.1gFeSO4·7H2O，20g瓊脂，121℃滅菌20min后，于60℃左右加含0.2%溴甲酚紫的聚乙烯醇橄欖油乳化液12mL。用0.1mol/LNaOH調(diào)pH8.0。PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200.0g/L，蔗糖20.0g/L，瓊脂20.0g/L。PDB培養(yǎng)基不添加瓊脂。發(fā)酵培養(yǎng)基：每升含1.0g(N
7、H4)2SO4，1.0gMgSO4·7H2O，1.0gNaH2PO4，2.0gK2HPO4，10mL橄欖油，20g黃豆粉，10g蔗糖。用0.1mol/LNaOH調(diào)pH8.0。種子培養(yǎng)基：每升含5.0g(NH4)2SO4，1.0gK2HPO4，0.5gMgSO4·7H2O，20g葡萄糖，25g蛋白胨，10mL橄欖油。用0.1mol/LNaOH調(diào)pH8.0。1.2試驗方法1.2.1產(chǎn)脂肪酶菌株的篩選1.2.1.1富集培養(yǎng)將采集的土樣10g溶于90mL蒸餾水中，充分搖勻，取上清液2mL加入到含20mL富集培養(yǎng)基的l00mL三角瓶中，30℃、
8、200r/min振蕩培養(yǎng)2d。再次取1mL富集培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到新的20mL富集培養(yǎng)基中，進行第2次富集。共富集3次。1.2.1.2平板分離將第3次富集培養(yǎng)液采用梯度稀釋法稀釋后涂布于篩選培養(yǎng)基上，30℃恒溫培養(yǎng)72h，紫外燈
