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《畢赤酵母表達巴曲酶發(fā)酵條件的優(yōu)化研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、蛇志JournalofSNAKE(Science&NAtureareKEytohealth)2009年第21卷第2期Vol.21No.2,2009畢赤酵母表達巴曲酶發(fā)酵條件的優(yōu)化研究1,22**222薛雁,徐梅,薛百忠,王宏英,蘭海英(11吉林大學,吉林長春130012;21遼寧諾康生物制藥有限責任公司,遼寧沈陽110171)[摘要]目的對表達重組巴曲酶的巴斯德畢赤酵母的發(fā)酵條件進行優(yōu)化,確定最佳的發(fā)酵控制條件以獲得重組巴曲酶的最高表達量。方法通過多因素正交實驗確定巴曲酶發(fā)酵培養(yǎng)的最適培養(yǎng)條件。結果表達溫度在25e,pH值為710,加入甲醇的量為10g/L時為最優(yōu)發(fā)
2、酵條件,誘導表達時間為84~96h。結論重組巴曲酶可以開發(fā)為止血藥,代替臨床應用的從蛇毒中提取的巴曲酶。[關鍵詞]重組巴曲酶;畢赤酵母;搖瓶發(fā)酵;發(fā)酵優(yōu)化[中圖分類號]R97713[文獻標識碼]A[文章編號]1001-5639(2009)02-0094-05StudiesonBatroxobinFermentationConditionsoftheEngineeredPichiaPastorisStrain1,22**222XUEYan,XUMei,XUEBai2zhong,WANGHong2ying,LANHai2ying(11JilinUniversity,Ch
3、angchun,Jilin,130012,China;21LiaoningNuokangBio2pharmaceuticalCo.,LTD,Shenyang,Liaoning,110171,China)Abstract:ObjectiveInordertoprovidetheoreticalbasisfortheindustrialproductionofba2troxobin.thebatroxobinfermentationconditionsofthegeneticengineeredPichiapastorisstrainKM71H/pPICZAA2Bgin
4、shake2flaskwerestudied.MethodsTheoptimumconditionsareselectedbyorthogonaldesign.ResultsTheoptimumtemperatureis25e,pHis710.metha2nolconcentrationis10g/L,timeis84~96h.theactivityofbatroxobinwasreachedto30Ku/ml.ConclusionRecombinantbatroxobincanbedevelopingashaemostattotaketheplaceofclini
5、cappliedbatroxobinpurifiedfromsnakevenom.Keywords:recombinantbatroxobin;Pichiapastori;shake2flaskfermentation;optimization巴曲酶(BatroxobinEC3.4.21.29)是1963年酶在畢赤酵母中進行表達,表達量達到31431NIH/[3]奧地利學者VonKlobusitzky首次從巴西矛頭蝮蛇ml,從每升發(fā)酵液中可純化得到710mg。李招發(fā)(Bothropsatrox)毒液中分離得到的一種絲氨酸蛋等于2007年也報道了將巴曲酶在畢赤酵母中進
6、行白水解酶(類凝血酶)。它作用于哺乳動物血漿中纖表達,表達量達到22Bu/ml,從每升發(fā)酵液中可純[4]維蛋白原A鏈中的Arg162Gly17間的肽鍵,釋放出化得到1010mg。目前還沒有對重組巴曲酶發(fā)酵纖維蛋白肽A,從而快速地將血液中的纖維蛋白原條件進行優(yōu)化研究的詳細報道。本研究對表達巴曲轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白,這些纖維蛋白就能聚集成疏松的酶的畢赤酵母KM71H/pPICZAA2Bg進行搖瓶發(fā)酵栓子來封閉傷口,實現(xiàn)快速止血的效果。同時,在體條件的研究,為發(fā)酵罐大規(guī)模表達奠定基礎。內(nèi)它并不激活凝血因子Y,由其水解產(chǎn)生的纖維蛋1材料與方法白凝塊的側鏈不能交聯(lián),易被纖維蛋白溶酶
7、降解,所111菌種PichiapastorisKM71H及質(zhì)粒[1,2]以不會造成血液系統(tǒng)的栓塞。目前,臨床應用pPICZAA菌株購自Invitrogen公司。表達重組巴的立止血和巴曲亭是從巴西矛頭蝮蛇蛇毒中分離純曲酶的工程菌KM71H/pPICZAA2Bg為本實驗室構化的天然巴曲酶。建。韓國的YouWeon2Kyoo于2004年報道了巴曲112培養(yǎng)基**:通訊作者。94蛇志JournalofSNAKE(Science&NAtureareKEytohealth)2009年第21卷第2期Vol.21No.2,200911211種子培養(yǎng)基YEPD固體培養(yǎng)基(每升含上
