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《細(xì)菌的莢膜染色》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、細(xì)菌的莢膜染色（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)細(xì)菌的莢膜染色法：（二）實(shí)驗(yàn)原理：由于莢膜與染料間的親和力弱，不易著色，通常采用負(fù)染色法染莢膜，即設(shè)法使菌體和背景著色而莢膜不著色，從而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。由于莢膜的含水量在90%以上，故染色時(shí)一般不加熱固定，以免莢膜皺縮變形。（三）實(shí)驗(yàn)器材1.活材料：培養(yǎng)3-5天的膠質(zhì)芽胞桿菌（Bacillusmucilaginosus，俗稱“鉀細(xì)菌”）。該菌在甘露醇作碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，莢膜豐厚。2.染色液和試劑：Tyler法染色液：（見附二、（一）、14）、用濾紙過濾后的繪圖墨水、復(fù)紅染色液（見附二、（一）
2、、2）、黑素（見附二、（一）、7）、6%葡萄糖水溶液、1%甲基紫水溶液、甲醇、20%CuSO4水溶液、香柏油、二甲苯。3.器材：載玻片、玻片擱架，擦鏡紙、顯微鏡等。（四）實(shí)驗(yàn)方法推薦以下四種染色法，其中以濕墨水方法較簡(jiǎn)便，并且適用于各種有莢膜的細(xì)菌。如用相差顯微鏡檢查則效果更佳。1.負(fù)染色法：（1）制片：4取潔凈的載玻片一塊，加蒸餾水一滴，取少量菌體放入水滴中混勻并涂布。（2）干燥：將涂片放在空氣中晾干或用電吹風(fēng)冷風(fēng)吹干。（3）染色：在涂面上加復(fù)紅染色液染色2—3min。（4）水洗：用水洗去復(fù)紅染液。（5）干燥：將染色片放空氣中晾干或用電吹
3、風(fēng)冷風(fēng)吹干。（6）涂黑素：在染色涂面左邊加一小滴黑素，用一邊緣光滑的載玻片輕輕接觸黑素，使黑素沿玻片邊緣散開，然后向右一拖，使黑素在染色涂面上成為一薄層，并迅速風(fēng)干。（7）鏡檢：先低倍鏡，再高倍鏡觀察。結(jié)果：背影灰色，菌體紅色，莢膜無色透明。2.濕墨水法（1）制菌液：加1滴墨水于潔凈的載玻片上，挑少量菌體與其充分混合均勻。（2）加蓋玻片放一清潔蓋玻片于混合液上，然后在蓋玻片上放一張濾紙，向下輕壓，吸去多余的菌液。（3）鏡檢：先用低倍鏡、再用高倍鏡觀察。結(jié)果：背景灰色，菌體較暗，在其周圍呈現(xiàn)一明亮的透明圈即為莢膜。3.干墨水法（1）制菌液：加
4、1滴6%葡萄糖液于潔凈載玻片一端，挑少量膠質(zhì)芽胞桿菌與其充分混合，再加1環(huán)墨水，充分混勻。（2）制片：4左手執(zhí)玻片，右手另拿一邊緣光滑的載玻片，將載玻片的一邊與菌液接觸，使菌液沿玻片接觸處散開，然后以30度角，迅速而均勻地將菌液拉向玻片的一端，使菌液鋪成一薄膜。（3）干燥：空氣中自然干燥。（4）固定：用甲醇浸沒涂片，固定1min，立即傾去甲醇。（5）干燥：在酒精燈上方，用文火干燥。（6）染色：用甲基紫染1—2min。（7）水洗：用自來水輕洗，自然干燥。（8）鏡檢：先用低倍鏡再高倍鏡觀察。結(jié)果：背景灰色，菌體紫色，莢膜呈一清晰透明圈。4.Ty
5、ler法（1）涂片：按常規(guī)法涂片，可多挑些菌體與水充分混合，并將粘稠的菌液盡量涂開，但涂布的面積不宜過大。（2）干燥：在空氣中自然干燥。（3）染色：用Tyler染色液染5—7min。（4）脫色：用20%CuSO4水溶液洗去結(jié)晶紫，脫色要適度（沖洗2遍）。用吸水紙吸干，并立即加1—2滴香柏油于涂片處，以防止CuSO4結(jié)晶的形成。（5）鏡檢：先用低倍鏡再用高倍鏡觀察。觀察完畢后注意用二甲苯擦去鏡頭上的香柏油。結(jié)果：背景藍(lán)紫色，菌體紫色，莢膜無色或淺紫色。（五）實(shí)驗(yàn)作業(yè)：繪出Bacillus4mucilaginosus的形態(tài)圖，并注明各部位的名稱
6、（六）注意事項(xiàng)1.加蓋玻片時(shí)不可有氣泡，否則會(huì)影響觀察。2.應(yīng)用干墨水法時(shí)，涂片要放在火焰較高處并用文火干燥，不可使玻片發(fā)熱。3.在采用Tyler法染色時(shí)，標(biāo)本經(jīng)染色后不可用水洗，必須用20%CuSO4沖洗。4
