重組人干擾素α2b栓(新增)

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1、重組人干擾素a2b栓ChongzuRenGanraosua2bShuanRecombinantHumanInterferona2bVaginalSuppository本品系由高效表達人干擾素a2b基因的大腸桿菌，經發(fā)酵、分離和純化后，加入栓劑基質中，經成型、掛膜制成。1．基本要求生產和檢定用設施、原料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。2．制造2.1工程菌菌種2.1.1名稱及來源重組人干擾素a2b工程菌株系由人干擾素a2b基因的重組質粒轉化的大腸桿菌菌株。2.1.2種子批的建立應符合“生物制品生產檢定用菌毒種管理規(guī)程”的規(guī)定。2.1.3菌種檢定種子批和工作種子批的菌種應進行以下各

2、項全面檢定。2.1.3.1劃種LB瓊脂平板應呈典型的大腸桿菌集落形態(tài)，無其他雜菌生長。2.1.3.2染色鏡檢應為典型的革蘭陰性桿菌。2.1.3.3對抗生素的抗性應與原始菌種相符。2.1.3.4電鏡檢查（工作種子批可免做）應為典型的大腸桿菌形態(tài)，無支原體、病毒樣顆粒及其他微生物污染。2.1.3.5生化反應應符合大腸桿菌生物學性狀。2.1.3.6干擾素表達量在搖床中培養(yǎng),應不低于原始菌種的表達量。2.1.3.7表達的干擾素型別應用抗a2b型干擾素參考血清作中和試驗，證明型別無誤。2.1.3.8質粒檢查該質粒的酶切圖譜應與原始重組質粒相符。2.1.3.9目的基因核苷酸序列檢查（工作種子批可免做）目的

3、基因核苷酸序列應與批準序列相符。2.2原液2.2.1種子液制備將檢定合格的工作種子批菌種接種于適宜的培養(yǎng)基（可含適量抗生素）中培養(yǎng)，供發(fā)酵罐使用。2.2.2發(fā)酵用培養(yǎng)基采用適宜的不含任何抗生素的培養(yǎng)基。2.2.3種子液接種及發(fā)酵培養(yǎng)在滅菌培養(yǎng)基中接種適量種子液。在適宜溫度下進行發(fā)酵，應采用經批準的發(fā)酵工藝，并確定相應的發(fā)酵條件，如溫度、pH值、溶氧、補料、發(fā)酵時間等。發(fā)酵液應定期進行質粒丟失率檢查（附錄ⅨG）。2.2.4發(fā)酵液處理用適宜的方法收集處理菌體。2.2.5初步純化采用經批準的純化工藝進行初步純化，使其純度達到規(guī)定的要求。2.2.6高度純化經初步純化后，采用經批準的工藝進行高度純化，使

4、其達到3.1項要求，即為人干擾素a2b原液。加入適宜穩(wěn)定劑，除菌過濾后保存于適宜溫度，并規(guī)定其有效期。2.2.7原液檢定按3.1項進行。2.3栓劑制備2.3.1配制按經批準的配方進行配制。將干擾素原液與基質分別平衡至37℃，混合均勻。采用的基質應符合附錄ⅠB的有關規(guī)定。2.3.2栓劑成型按經批準的生產工藝進行。栓劑外形應完整光滑，并應有適宜的硬度，以免在包裝或貯藏時變形。2.4成品2.4.1分批應符合“生物制品分批規(guī)程”規(guī)定。2.4.2規(guī)格應為經批準的規(guī)格。2.4.3包裝應符合“生物制品包裝規(guī)程”和附錄ⅠB的有關規(guī)定。3檢定3.1原液檢定3.1.1生物學活性依法測定（附錄ⅩC）。3.1.2蛋白

5、質含量依法測定（附錄ⅥB第二法）。3.1.3比活性為生物學活性與蛋白質含量之比，每1mg蛋白質應不低于1.0×108IU。3.1.4純度3.1.4.1電泳法依法測定（附錄ⅣC）。用非還原型SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法，分離膠膠濃度為15%，加樣量應不低于10μg(考馬斯亮藍R250染色法)或5μg（銀染法）。經掃描儀掃描，純度應不低于95.0%。3.1.4.2高效液相色譜法依法測定（附錄ⅢB）。色譜柱以適合分離分子質量為5-60kD蛋白質的色譜用凝膠為填充劑；流動相為0.1mol/L磷酸鹽—0.1mol/L氯化鈉緩沖液，pH7.0；上樣量應不低于20μg，于波長280nm處檢測，以干擾素色譜峰

6、計算理論板數(shù)，應不低于1000；按面積歸一化法計算，干擾素主峰面積應不低于總面積的95.0%。3.1.5分子量依法測定（附錄ⅣC）。用還原型SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法，分離膠膠濃度為15%，加樣量應不低于1.0mg，分子質量應為19.2kD±1.92kD。3.1.6外源性DNA殘留量每1支應不高于10ng每100μg蛋白質應不高于10ng（附錄ⅨB）。3.1.7鼠IgG殘留量如采用單克隆抗體親和色譜法純化，應進行本項檢定。每1支鼠IgG殘留量應不高于100ng每1μg蛋白質應不高于10ng（附錄ⅨL）。3.1.8宿主菌蛋白殘留量應不高于總蛋白質的0.10%（附錄ⅨC）。3.1.9殘余抗生素活

7、性依法測定（附錄ⅨA），不應有殘余氨芐西林或其他抗生素活性。3.1.10等電點主區(qū)帶應為4.0～6.7,供試品的等電點與對照品的等電點圖譜一致（附錄ⅣD）。3.1.11紫外光譜掃描用水或生理氯化鈉溶液將供試品稀釋至約100μg/ml～500μg/ml，在光路1cm、波長230nm～360nm下進行掃描，最大吸收峰波長應為278±3nm（附錄ⅡA）。3.1.12肽圖(至少每半年測定一次)依法測定（附