《不同分離介質(zhì)對小鼠原代肝星狀細胞分離純化效果的影響-論文》

《《不同分離介質(zhì)對小鼠原代肝星狀細胞分離純化效果的影響-論文》》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、64·主堡塞墜I病毒學(xué)盤查14年2月_28卷第1期ChineseJExpClinVirol，F(xiàn)ebruary2014，Vo1．28，No．1技術(shù)方法．不同分離介質(zhì)對小鼠原代肝星狀細胞分離純化效果的影響李紅敏，任慧，郝曉花，黃玉波，魏紅山【摘要】目的比較不同的分離介質(zhì)對小鼠原代肝星狀細胞(hepaticstellatecells，HSCs)分離純化效率的差異。方法肝門靜脈原位灌注，預(yù)灌注不含鈣鎂離子的D—Hanks液及含有Ⅳ型膠原酶的灌注液，取消化后的肝臟，分別采用Ficoll—PaquePLUS、Percoll、Nycodenz作為分層介質(zhì)，密度梯度離心純化原代HSCs。顯微鏡

2、下觀察細胞純度并計算細胞得率。錐蟲藍染色判斷細胞活率。激光共聚焦顯微鏡觀察原代HSCs的固有熒光情況。油紅O染色觀察獲得原代HSCs的純度情況。結(jié)果采用Ficoll—PaquePLUS、Percoll、Nycodenz分離細胞得率分別為(1±0．5)×10。，(1±0．5)×10，(0．8±0．5)×10；純度分別為75％～85％，91％～95％，91％一95％；活率均高于90％。結(jié)論用Nycodenz作為分離介質(zhì)分離肝星狀細胞的方案最優(yōu)?！局黝}詞】肝硬化；細胞，培養(yǎng)的；細胞／分離和提純；小鼠Theperformanceofdiferentisolationregentsfor

3、purificationofmiceprimaryhepaticstellatecellsLiHongmin，RenHui，HaoXiaohua，HuangYubo，WeiHongshan．BeijingDitanHospital，CapitalMedicalUniversity，Beng100015，ChinaCorrespondingauthor：WeiHongshan，Email：drwei@ccmu．edu．cn【Abstract】0bjectiveTocomparetheadvantagesanddisadvantagesofthethreeisolationrege

4、ntsforisolatingprimaryhepaticstellatecells(HSCs)ofmice．MethodsThemiceHSCswasisolatedbyinsituperfusionofper—perfusionsolution，perfusionwithcollagenaseIV．Afterdigestion，F(xiàn)icoll—PaquePLUS，percollandNycodenzwereuseforthegradientcentrifugation．Tocalculatethequantity，purityandtheviabilityoftheHSCs．

5、TheautofluorescenceandOilOstainingwereusedtoidentifyprimaryHSCs．ResultsThequantityofHSCswas(1．0±0．5)×10。，(1．0±0．5)×10，(0．8±0．5)×10。／g—liver，respectively．UsingFicoll—PaquePLUS，percollandNycodenz，thepurityofprimaryHSCswere75％一85％，91％·95％，91％一95％，respectively．Theviabilitywereallabove90％．Conclus

6、ioncomparedwithFicoll—PaquePLUSandpercoll，theNycodenzisthethebestseparatingmediumforisolationandpurificationofmiceprimaryHSCs．【Keywords】Livercirrhosis；Cells，cultured；Cells／isolationandpurification；Mice肝星狀細胞(hepaticstellatecell，HSC)，是肝內(nèi)種不同介質(zhì)分離小鼠HSCs的性能進行了比較分的一種非實質(zhì)細胞，占肝細胞的5％～8％，分布于析，結(jié)果顯示，與其他分離

7、介質(zhì)相比，Nycodenz具有肝臟的Disse隙內(nèi)，是合成、分泌細胞外基質(zhì)的主要較好的分離純化性能。來源。HSCs活化產(chǎn)生的細胞因子導(dǎo)致肝臟細胞外1材料與方法基質(zhì)降解和膠原纖維增加是肝纖維化發(fā)生、發(fā)展的主要原因。因此，原代HSCs的分離、培養(yǎng)也就成為1．1材料Ficol1．PaquePLUS、Percol1分離介質(zhì)肝纖維化發(fā)病機制研究的關(guān)鍵。但與大鼠HSCs相(GEHeahhcare公司)，以及Nycodenz(Axis—shield公比，小鼠原代HSCs分離純化更為困難。我們對幾司)按照制