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《改良的小鼠原代肝細(xì)胞分離純化方法》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第28卷第11期南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)2008年11月ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING(Natura1Science)·1437·改良的小鼠原代肝細(xì)胞分離純化方法余瑩，張日華，朱自強(qiáng)，王林濤(南京醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)系，江蘇南京210029；南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年科，江蘇南京210029)[摘要]目的：建立一種簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、高效的小鼠肝細(xì)胞分離和純化方法。方法：對(duì)傳統(tǒng)的兩步原位膠原酶灌流法進(jìn)行改進(jìn)，縮短消化時(shí)間和改變灌注方式；分離的小鼠肝細(xì)胞，采用低速離b(3oor／min
2、，1min，3—5次)純化，臺(tái)盼蘭染色檢測(cè)活率，糖原染色鑒定肝細(xì)胞．并與單密度梯度離心純化法進(jìn)行比較。結(jié)果：原代肝細(xì)胞經(jīng)低速離心純化后，活率達(dá)到90％左右，純度達(dá)95％以上．與密度梯度離心法效果相近。結(jié)論：建立了一種新的小鼠原代肝細(xì)胞的分離純化方法。[關(guān)鍵詞]小鼠原代肝細(xì)胞；原代培養(yǎng)；IV型膠原酶[中圖分類號(hào)]R329．26[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1007—4368(2008)11-1437—04AnimprovedmethodforisolationhepatocytesofmiceYUYing，ZHANGRi—hua，ZH
3、UZi—qing，WANGLin—tao(DepartmentofBiochemistO"andMolecularBiology"，NJMU，Nanjing210029；DepartmentofGeratology，theFirstAfiliatedHospitalofNJMU，Nanjing210029，China)[Abstract]Objective：Todevelopaconvenient，inexpensiveandefficiencymethodforseparatehigh-purityprimaryhepatocy
4、tesisolationofmurine．Methods：TheimprovedmethodwasusedwithlowconcentrationtypeIVcollagenase．Purifiedhepatocyteswereseparatedfromthedissociativecellsbylow·speedcentrifugation(300r／min，1min，3-5times)．Thesurvivalratewasmeasuredbytypanblueexclusionandthepuritywasmeasuredby
5、PASstaining．Thetime，viabilityandpurityoftwomethodswerecompared．Results：Thecellviabilitywashigherthanthatofcellsobtainedbytraditionalmethod，andthequantityofcollagenaseandthetimeusedwasdecreasedmarkedly．Thepuritywasnearlythesameasthemethodofpercollpurity．Conclusion：Anew
6、methodforseparatehigh—purityprimaryhepatocytesisolationwassullessfullyestablished．[Keywords]mouseprimaryhepatocytes；primaryculture；typeIVcollagenase[ActaUnivMedNanjing，2008，28(11)：1437—1440]肝臟是人體最重要的代謝器官，在多種生理病度梯度離心法【9進(jìn)行純化，所得細(xì)胞數(shù)量多．活力理過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。肝細(xì)胞行使了肝臟主要好，純度高，并且保留了肝細(xì)
7、胞的各項(xiàng)功能。該方法的功能，如碳水化合物的轉(zhuǎn)化、膽汁的生成、蛋白質(zhì)也存在操作復(fù)雜，技術(shù)要求高，所需時(shí)間長(zhǎng)．易污的合成及儲(chǔ)存等?。原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞廣泛用于毒染，經(jīng)濟(jì)成本高等缺陷，限制了原代肝細(xì)胞在研究理學(xué)、藥理學(xué)[引、生物化學(xué)[3]、分子生物學(xué)[]相關(guān)的研中的廣泛應(yīng)用。本文建立了一種簡(jiǎn)單易行、經(jīng)濟(jì)實(shí)究。但原代肝細(xì)胞增殖能力差，不易長(zhǎng)時(shí)間保存[]或用的小鼠原代肝細(xì)胞分離純化方法，為進(jìn)一步進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)其生物學(xué)性狀會(huì)發(fā)生改變I6]。因此建立簡(jiǎn)相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)單易行的分離純化肝細(xì)胞的方法顯得十分重要。目1材料和方法前采用的Seglen門(mén)靜
8、脈兩步灌流法【7J及其改良的方法I8]分離大鼠原代肝細(xì)胞，并聯(lián)合應(yīng)用percoll單密1．1材料雄性ICR小鼠(南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提[基金項(xiàng)目]南京醫(yī)科大學(xué)?；鹳Y助(NY02071)供)，6-9周齡。EGTA、HEPES、IV型膠原酶(Si
