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《枯草芽孢桿菌sacB基因的功能驗證及應(yīng)用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、核農(nóng)學(xué)報2008,22(5):590～594590JournalofNuclearAgriculturalSciences文章編號:100028551(2008)052590205枯草芽孢桿菌sacB基因的功能驗證及應(yīng)用11,2111吳菁劉秀敏張維陳明林敏(11中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所,北京100081;21河北交通職業(yè)技術(shù)學(xué)院,河北石家莊050091)摘要:本研究將枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)基因組DNA中克隆的114kbsacB基因片段連接到表達載體pET228a(+),構(gòu)建了sacB基因表達載體pSa
2、cB。通過測定蔗糖水解產(chǎn)生的葡萄糖具有的還原性,確定sacB基因產(chǎn)物具有蔗糖果聚糖酶活性。該基因表達后,導(dǎo)致大腸桿菌(Escherichiacoli)細胞不能在含5%蔗糖的培養(yǎng)基中生存。同時發(fā)現(xiàn)sacB基因也能賦予耐輻射菌株Deinococcussp.BR501蔗糖敏感性。利用條件致死sacB基因的這一特性,我們分析了D.sp.BR501的突變率,結(jié)果表明DNA錯配修復(fù)缺失突變株(ΔmutS1)的突變頻率明顯高于野生型。因此枯草芽孢桿菌sacB基因可作為驗證DNA損傷修復(fù)能力的一種篩選標記。關(guān)鍵詞:枯草芽孢桿菌;sacB基因;蔗糖
3、果聚糖酶;突變率FUNCTIONALIDENTIFICATIONOFBacillussubtilissacbGENEANDITSAPPLICATIONWUJingLIUXiu2minZHANGWeiCHENMingLINMin(11BiotechnologyResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081;21HebeiJiaotongVocational&TechnicalCollege,Shijiazhuang,Hebei050091)Ab
4、stract:Inthisstudy,the114kbsacBgenefromBacillussubtilisgenomicDNAwasclonedintotheexpressionvectorpET228a(+).TheproductofgenesacBhadthelevansucraseactivitydeterminedbyglucosereleasefromsucrosehydrolysis.TheexpressionofsacBgeneinEscherichiacolicouldcausecelldeathwhenexp
5、osedto5%sucroseinmedium.AndsacBgenealsoconferedasucrose2sensitivephenotypefortheextremelyradiation2resistantbacterium,Deinococcussp.BR5011Usingtheconditional2lethalgenesacBtoanalyzethemutationratesofDeinococcussp.BR501,wefoundthattherateoftheDNAmismatchrepairdeficient
6、strain(ΔmutS1)wasobviouslyhigherthanthatofwildtypestrain.OurresultsuggestedthatB.subtilissacBgenecouldbeusedasanegative2selectionmarkertoidentifyandcharacterizethegenesinvolvedinDNAdemagerepair.Keywords:Bacillussubtilis;sacBgene;levansucrase;mutationrate枯草芽孢桿菌(Bacillu
7、ssubtilis)是存在于土壤和植枯草芽孢桿菌sacB基因編碼分泌型蔗糖果聚糖物微生態(tài)系統(tǒng)中的優(yōu)勢微生物種,廣泛存在于自然界。酶,該酶能催化蔗糖水解和合成高分子量的果聚糖。沒有致病性,對人畜無害,不污染環(huán)境,具有很強的抗蔗糖果聚糖酶在食品、制藥、化妝品和紡織工業(yè)中都有[1][2,3]逆能力和抗菌防病作用。很廣泛的應(yīng)用前景。鑒于sacB基因具有合成果聚收稿日期:2008202228接受日期:2008205211基金項目:國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃項目(2004AA214170)課題和國家自然科學(xué)基金項目(206700050)作者簡介:
8、吳菁(19822),女,河北石家莊人,碩士,從事極端環(huán)境微生物遺傳工程的研究。Tel:010268919861;E2mail:wujing21224@gmail.com通訊作者:陳明(19622),男,廣東興寧人,博士,從事分子生物學(xué)研究。Tel:
