慢病毒載體構(gòu)建及結(jié)構(gòu)優(yōu)化

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1、·310·國外醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)分冊2002年第24卷第5期其次,采用一種含有拯救rAAV基因組的細(xì)胞株,能感染分裂細(xì)胞又能感染非分裂細(xì)胞;③它的內(nèi)源[9]又提高了包裝效率5倍。Mamounas等報(bào)道運(yùn)用性弱啟動(dòng)子對外源基因的調(diào)控?zé)o明顯的干擾作用;Ad52多聚賴氨酸2轉(zhuǎn)鐵蛋白2DNA2Ad8復(fù)合物感染且啟動(dòng)的方向不指向宿主細(xì)胞DNA,因此通過插入[10]HeLa細(xì)胞,可使轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提高近245倍。病毒啟動(dòng)子而激活細(xì)胞原癌基因的可能性極小;④Lebkowski等將AAV的rep和cap基因轉(zhuǎn)染入其基因組結(jié)構(gòu)極為穩(wěn)定,有利商業(yè)開發(fā);⑤可以口服[18]293細(xì)胞,建立了rAAV包裝

2、細(xì)胞系,也增加了病毒給藥,使給藥方式更加方便。盡管AAV的一些生的滴度。物學(xué)特性尚待闡明,AAV載體在體內(nèi)能否定向整純化AAV病毒的傳統(tǒng)方法是加熱失活法和平合尚待明確,但現(xiàn)有資料使人們有理由相信AAV衡密度梯度離心法。為了獲得高滴度的rAAV載體載體將是未來基因轉(zhuǎn)移中最有希望的新一代病毒載用于臨床實(shí)驗(yàn),Fan等用增加rep2cap質(zhì)粒拷貝數(shù)來體之一。[11]增加產(chǎn)量,但需要仔細(xì)調(diào)節(jié)Rep78?68的水平。參考文獻(xiàn)Hermens用iodixanol密度梯度離心法取代Cscl法,縮短了離心時(shí)間,獲得了高濃度的rAAV,減少1BernsKI,LindenRM.Bioessay

3、s,1995;17:237了Cscl對病毒的毒性作用[12]。對于AAV22而言,2SanliogluSetal.HumanGeneTher,1999;10:591由于存在細(xì)胞表面受體3SamulskiRJetal.EMBOJ,1991;10:3941,所以能用親和層析法純化,4BalagueCetal.JVirol,1997;71:3299避免了Cscl和幫助者病毒的污染。這些細(xì)胞表面受5TangRS.Bioessays,1994;16:785體包括硫酸乙酰酣素糖蛋白受體、聯(lián)合輔助受體、6KotinRM.HumanGeneTher,1994;5:793[13]AVB5

4、整合素受體和人FGF受體。7KearnsWGetal.GeneTher,1996;3:7485rAAV載體目的基因的表達(dá)8AlexanderIEetal.JVirol,1994;68:82829FlotteTRetal.GeneTherapy,1995;2:29基因治療能否成功的關(guān)鍵是靶基因能在靶細(xì)胞10MammounasMetal.GeneTherapy,1995;2:429內(nèi)高效、穩(wěn)定、足量、長期的表達(dá)。已有研究表明11FanPD,DongJY.HumGeneTher,1997;8:87rAAV能夠在動(dòng)物體內(nèi)超過18個(gè)月的表達(dá)。除了采12HermensWTetal.

5、HumGeneTher,1999;10:1885用更強(qiáng)的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子來取代常用的CMV、13ZolotukhinS.GeneTher,1999;6:973[14]14RuanHetal.Neoplasia,2001;3(3):255SV40啟動(dòng)子之外,缺氧(<0.01%O2)、紫外[15][16]15KanazawaTetal.CancerGeneTher,2001;8(2):99線、羥基脲、perfluorochemical(PFC)liquids、16WeissDJetal.MolTher,2000;2(6):624[17]細(xì)胞因子、腫瘤壞死因子A等也可提高目的基

6、因17NathwaniACetal.GeneTher,2000;7(3):183的表達(dá)。18MatthewJDetal.NatureMedicine,1998;4(10):綜上所述,AAV作為載體有許多優(yōu)點(diǎn):①它是1131一種非病原微生物,與已知的人類疾病無關(guān);②它既(2002201216　收稿)慢病毒載體構(gòu)建及結(jié)構(gòu)優(yōu)化李振宇綜述　徐開林　潘秀英審閱徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液科(徐州,221002)　　摘要　慢病毒載體目前是基因治療中研究較多的載體,與通常使用的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和腺病毒載體比較,它有感染非分裂期細(xì)胞及容納外源性目的基因片段大等優(yōu)點(diǎn)。對其結(jié)構(gòu)的優(yōu)化主要集中在提高

7、生物安全性、提高轉(zhuǎn)基因表達(dá)、轉(zhuǎn)基因表達(dá)的調(diào)控及載體靶向性等方面。本文介紹了慢病毒載體構(gòu)建及結(jié)構(gòu)優(yōu)化方面的研究進(jìn)展作一綜述。關(guān)鍵詞　慢病毒載體;載體構(gòu)建;結(jié)構(gòu)優(yōu)化　　目前基因治療中目的基因的轉(zhuǎn)移工具多采用病常用。由于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體只能感染分裂期細(xì)胞,容毒載體,其中以逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和腺病毒載體最為納外源基因的DNA片段長度不超過8kb;腺病毒國外醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)分冊2002年第24卷第5期·311·載體感染細(xì)胞時(shí),病毒DNA游離在細(xì)胞核內(nèi),并不高速離心對載體進(jìn)行濃縮,提高了滴度;轉(zhuǎn)移質(zhì)粒中整合到染色體上,在體內(nèi)不能實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的長期表達(dá),除含有包裝