總黃酮含量測定方案

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1、總黃酮含量測定一樣品溶液的制備70%乙醇溶液，料液比1﹕8，80度下回流2h。取10g樣品放入圓底燒瓶中加入80ml70%乙醇溶液回流2h,抽濾定容至100ml備用。使用時先離心再用70%乙醇稀釋10倍做樣品溶液。二蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的配置精密稱取蘆丁2mg，加無水乙醇定容至10ml。制得濃度為0.2mg/ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。三顯色方法的確定1掃描原液分別取蘆丁溶液和樣品溶液各1ml，加無水乙醇定容至25ml，空白對照，全波掃描。2硝酸鋁顯色法分別取蘆丁對照品溶液和樣品溶液各5ml，加5%亞硝酸鈉溶液（1.25g亞硝酸溶于無水乙醇中定容到25ml容量瓶中)1ml,搖勻，放置6min，

2、加10%硝酸鋁溶液(4,4014g硝酸鋁.九水溶于無水乙醇中定容到25ml容量瓶中)1ml，搖勻，放置6min，加4%氫氧化鈉試液(2g氫氧化鈉溶于無水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml,再加無水乙醇定容至25ml，搖勻，放置15min，空白對照，全波掃描bb。3氯化鋁顯色法分別取蘆丁對照溶液和樣品溶液各5ml,加1%的氯化鋁溶液（1g氯化鋁溶于無水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，搖勻放置10min，空白對照，全波掃描。4氫氧化鉀顯色法分別取蘆丁對照品溶液和樣品溶液各5ml，加3ml10%氫氧化鉀溶液（2.5g氫氧化鉀溶于無水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分

3、搖勻顯色5min后，用無水乙醇定容至25ml,搖勻，空白對照，全波掃描。四顯色條件的確定五標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml蘆丁對照品溶液，按所選的顯色方法測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。六精密度實(shí)驗(yàn)按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法，分別準(zhǔn)確量取1.0ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液5份，按所選顯色劑和所確定的最優(yōu)顯色條件在所選波長下測定吸光度。次數(shù)12345吸光度平均值相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（%）七重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取火棘果樣品5份各10g,按提取步驟制得樣品液，按制備標(biāo)準(zhǔn)曲線方法顯色后測定吸光度值并計(jì)算總黃酮含量。次數(shù)12345總黃酮含量（%）平均值（%）相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（%）八穩(wěn)定性試

4、驗(yàn)取制備好的同一樣品溶液，將其顯色后每10min測定一次，共測定7次，記錄吸光度并計(jì)算總黃酮含量。比色時間(min)0102030405060總黃酮含量（%）平均值相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（%）九回收率實(shí)驗(yàn)分別準(zhǔn)確量取已知總黃酮含量為mg/ml的1ml提取液5份，分別加入一定量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，按上述方法進(jìn)，測定吸光度，計(jì)算黃酮含量，根據(jù)回收率公式計(jì)算出加樣回收率?；厥章?（混合后測得量—樣品中總黃酮含量）/蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品加入量*100樣品號樣品中總黃酮含量（mg）蘆丁加入量（mg）測定量（mg）回收率（%）平均回收率（%）相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（%）12345十樣品含量測定分別取3份樣品溶液各

5、1ml,按制備標(biāo)準(zhǔn)曲線方法顯色后測定吸光度值并計(jì)算總黃酮含量。