《抗體融合蛋白》PPT課件

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1、抗體融合蛋白目錄抗體融合蛋白的定義抗腫瘤抗體藥物的發(fā)展趨勢VEGF-EGFR多靶向Fc融合蛋白EVP1的構(gòu)建及其結(jié)合特性抗體融合蛋白將抗體分子片段與其他蛋白融合，可得到多樣性生物功能的融合蛋白如：1.含F(xiàn)v段的抗體融合蛋白：將Fv與某些毒素、酶、細(xì)胞因子基因拼連，通過這些抗體的引導(dǎo)，可將其生物活性物質(zhì)導(dǎo)向靶細(xì)胞特定部位，所謂“生物導(dǎo)彈”。2.嵌合受體：將ScFv與某些細(xì)胞膜蛋白分子融合，形成的融合蛋白，可表達于細(xì)胞表面，稱為嵌合受體，由于其介導(dǎo)的殺傷效應(yīng)不受MHC限制，在過繼性免疫治療中有潛在應(yīng)用價值。3.含F(xiàn)c的抗體融合蛋白：CD4分子細(xì)胞膜外部分與Fc融合后由真核細(xì)胞表達

2、。此融合蛋白能競爭結(jié)合HIV，阻斷HIV對敏感細(xì)胞的感染；還可介導(dǎo)ADCC及CDC，可通過胎盤?？贵w藥物抗體藥物是以細(xì)胞工程技術(shù)和基因工程技術(shù)為主體的抗體工程技術(shù)制備的藥物。其具有特異性高、性質(zhì)均一及針對特定靶點定向制備等優(yōu)點?？贵w藥物主要用于惡性腫瘤、免疫性疾病、移植排斥反應(yīng)、感染性疾病和心血管疾病等的治療，特別是其對腫瘤治療的應(yīng)用前景備受關(guān)注?？鼓[瘤抗體藥物的分類按抗腫瘤抗體藥物結(jié)構(gòu)可將其分為4類1.抗體，也稱裸抗體。根據(jù)其人源化的程度，又可分為鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體、完全人源抗體。2.抗體片段，包括Fab’、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、微型抗體等。3.抗體偶聯(lián)

3、物，由抗體或抗體片段與“彈頭”藥物連接而成?？捎米鳌皬楊^”的物質(zhì)有放射性核素、化學(xué)治療(化療)藥物和毒素。這些“彈頭”物質(zhì)與抗體連接，分別構(gòu)成放射免疫偶聯(lián)物、化學(xué)免疫偶聯(lián)物和免疫毒素。4.抗體融合蛋白，由抗體片段和活性蛋白兩部分構(gòu)成。抗腫瘤抗體藥物的特點抗體藥物有以下幾個特點1.具有高親和性和特異性，使得抗體藥物高效特異性地發(fā)揮靶向治療作用。2.半衰期短，平均為10~21d，從而減少了使用次數(shù)，易被患者接受。3.多樣性，主要表現(xiàn)為靶抗原的多樣性，抗體結(jié)構(gòu)(抗原互補決定區(qū)氨基酸序列變化)的多樣性和作用機制的多樣性以及“彈頭”化合物的多樣性。4.制備抗腫瘤抗體藥物的定靶性；即根據(jù)

4、需要利用基因工程技術(shù)制備具有不同治療作用的抗體藥物?？梢葬槍μ囟ǖ陌蟹肿樱ㄏ蛑苽湎鄳?yīng)的抗體；也可以根據(jù)需要選擇相應(yīng)的“彈頭”藥物或效應(yīng)分子，制備相應(yīng)的免疫偶聯(lián)物或融合蛋白?？鼓[瘤抗體藥物的發(fā)展趨勢抗腫瘤抗體藥物由單一靶點到多靶點方向發(fā)展抗腫瘤抗體藥物的高效小型化抗體組學(xué)和抗體組藥物的興起近年來單克隆抗體﹙單抗﹚藥物發(fā)展迅猛，僅2010年全球就有30余個單抗藥物經(jīng)批準(zhǔn)上市銷售，已產(chǎn)生500億美元以上的年銷售額。然而，對于復(fù)雜的惡性腫瘤，其病因復(fù)雜，細(xì)胞內(nèi)信號通路冗余或交叉，單一靶點的治療適用性窄且易產(chǎn)生耐藥性，因而多靶向藥物已成為抗體領(lǐng)域的重要發(fā)展方向?，F(xiàn)在應(yīng)用較多的已上市的

5、單克隆抗體藥物，有針對腫瘤細(xì)胞增殖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的利妥昔單抗、曲妥珠單抗、吉非替尼、厄洛替尼、伊馬替尼、埃克替尼和西妥昔單抗，以及針對腫瘤新血管生成的貝伐珠單抗等一大批分子靶向藥物這些抗腫瘤抗體藥物都是針對單一的靶點，但是腫瘤的發(fā)生是一個多因素、多步驟的過程，從單一靶點對腫瘤治療是遠(yuǎn)不夠的。從2005年以來臨床研究證實，索拉非尼等多靶點藥物可使晚期腎癌患者的無進展生存期延長一倍。阻斷其他通路的藥物，如注射用的mTOR抑制藥替西羅莫司和口服的mTOR抑制藥依維莫司，相繼在2007年和2010年也獲FDA批準(zhǔn)上市。非小細(xì)胞肺癌的靶向治療除了吉非替尼和厄洛替尼等單靶點藥物以外，凡德他

6、尼和索拉非尼也在進行臨床試驗，初步結(jié)果令人鼓舞。2009與2011年，生物制藥巨頭Genentech公司基于“two-in-one”策略，相繼開發(fā)了同時靶向VEGF與HER2，以及同時靶向EGFR與HER3的雙特異性抗體，療效明顯優(yōu)于針對單個靶標(biāo)的單抗治療，在國際上引起強烈反響雙特異性抗體抗體兩個結(jié)合點表現(xiàn)為不同的特異性，即分別結(jié)合不同表位。如，一個結(jié)合靶細(xì)胞（如腫瘤細(xì)胞），另一結(jié)合藥物或免疫效應(yīng)細(xì)胞（如蓖麻毒素、抗癌藥物、細(xì)胞毒性細(xì)胞）雙特異性抗體左明輝等于2012年研制出種同時結(jié)合VEGF，EGFR，HER2的Fc融合蛋白EVP1，是一種富有潛力的多靶向抗體類治療腫瘤藥物

7、。VEGF-EGFR多靶向Fc融合蛋白EVP1的構(gòu)建方法：1.利用PCR方法擴增Herin基因和Flt-1基因Ig樣第二結(jié)構(gòu)域﹙FLt-1D2﹚編碼序列，全序列合成帶有點突變的HumanIgG1的Fc段編碼序列，利用重組PCR方法將Herin、Flt-1D2和Fc基因依次連接，構(gòu)成Herin-Flt-1D2-Fc基因﹙命名為EVP1基因﹚。2.再將EVP1編碼基因插入質(zhì)粒pDC659，構(gòu)建攜帶EVP1基因的腺病毒穿梭質(zhì)粒pDC659-EVP1。3.將質(zhì)粒pDC659-EVP1與腺病毒骨架載體pPE3-F