《病毒學(xué)Virology》PPT課件

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1、病毒學(xué)(Virology)病毒學(xué)（Virology）病毒學(xué)是研究病毒這一特殊生命形式的性質(zhì)及其與宿主相互作用的關(guān)系的自然學(xué)科，是跨生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)學(xué)的交叉學(xué)科，是分子生物學(xué)研究領(lǐng)域的前沿學(xué)科。第一章緒論第一節(jié)病毒學(xué)研究的對(duì)象與任務(wù)一、病毒學(xué)研究的對(duì)象病毒（Virus）是一種特殊的生命形式，是一種極為簡(jiǎn)單的生命形式。（一）病毒的特點(diǎn)1、病毒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單(1)不具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)(2)只具有一種核酸（DNA或RNA）(3)不含核糖體和完整的酶系統(tǒng)，也不具有能量合成和代謝系統(tǒng)。2、獨(dú)特的繁殖方式(1)不具有雙分裂(2)以復(fù)制方式進(jìn)行繁殖3、絕對(duì)的細(xì)胞內(nèi)寄

2、生4、病毒的二重性(1)病毒存在形式的二重性*細(xì)胞外具有感染性的顆粒形式*細(xì)胞內(nèi)具有繁殖性的基因形式(2)病毒結(jié)構(gòu)形式的二重性*完全病毒與缺損病毒（defectvirus）*病毒與假型病毒(pseudotypevirus)、假毒粒(pseudovirion)*病毒顆粒與空殼(3)病毒來(lái)源的二重性*外源性病毒從細(xì)胞外到細(xì)胞內(nèi)在細(xì)胞間水平傳播的病毒*內(nèi)源性病毒在宿主發(fā)育早期感染宿主，病毒基因組整合于宿主基因組并與其同步復(fù)制，隨細(xì)胞分裂垂直傳遞給子代細(xì)胞，但因其受宿主細(xì)胞控制，病毒基因組只能部分表達(dá)，故沒(méi)有子代病毒產(chǎn)生，且對(duì)宿主一般不造成傷害。

3、（二）病毒的定義病毒是占據(jù)一定生境，并具有獨(dú)立于其宿主進(jìn)化史的絕對(duì)細(xì)胞內(nèi)寄生物，其基因組（DNA或RNA）被其自身編碼的蛋白質(zhì)外殼所包圍。(三）、病毒的宿主范圍宿主范圍：病毒所能感染的宿主和宿主細(xì)胞的種類按宿主種類劃分EuvirusVirusSubvirusViroidSatelliteagentSatelliteRNASatellitevirusPrionPlantVirusesInsectVirusesAnimalViruses蟲(chóng)媒病毒（arbovirus）以蚊、蜱、螨、白蛉等節(jié)肢動(dòng)物為媒介，在脊椎動(dòng)物中廣泛傳播的病毒。（四）、病毒的

4、起源三種假說(shuō)：病毒起源于細(xì)胞的DNA/RNA病毒的退行性進(jìn)化假說(shuō)病毒起源于具有復(fù)制能力的寡聚核苷酸四、病毒學(xué)研究任務(wù)理論方面：推進(jìn)現(xiàn)代生物學(xué)的發(fā)展應(yīng)用方面：控制和消滅危害人類健康和社會(huì)發(fā)展的病毒危害利用病毒對(duì)有害生物進(jìn)行生物防治促進(jìn)生物高新技術(shù)的發(fā)展第二章病毒學(xué)研究的基本方法一、病毒的分離（一）標(biāo)本的采集與處理（二）標(biāo)本的接種：實(shí)驗(yàn)宿主（動(dòng)物、植物或細(xì)菌），雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)（三）病毒存在的認(rèn)定1、系統(tǒng)癥狀2、局部反應(yīng)(1)噬菌體—噬菌斑(plaque)噬菌體感染生長(zhǎng)在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上的細(xì)菌所形成的，具有一定大小和形狀的透明區(qū)域。(2)動(dòng)物病毒

5、—蝕斑或稱空斑(plaque)動(dòng)物病毒感染單層細(xì)胞培養(yǎng)所形成的局部病損區(qū)域，系由病毒的致細(xì)胞病變作用所引起．致細(xì)胞病變作用（Cytopathiceffect，CPE）：病毒感染細(xì)胞培養(yǎng)引起的細(xì)胞顯微表現(xiàn)的改變，如細(xì)胞聚集成團(tuán)，腫大、園縮、脫落、細(xì)胞融合形成多核細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)包涵體（inclusionbody），乃至細(xì)胞裂解等（３）植物病毒－壞死斑或稱枯斑（necrosisspot）植物病毒感染敏感植物葉片所形成的局部病損區(qū)域．（四）盲傳（blindpassage）將取自經(jīng)接種而末出現(xiàn)感染癥狀的宿主或細(xì)胞培養(yǎng)的材料，再接種于新的宿主或細(xì)胞

6、培養(yǎng)，以提高病毒的毒力或效價(jià)．二、病毒的純化(一)病毒的純化1.病毒純化的標(biāo)準(zhǔn)(1)純化的病毒制備物應(yīng)保持感染性(2)純化的病毒制備物應(yīng)具有均一性病毒制備物均一性檢查的方法包括：電鏡檢查、超速離心、電泳和免疫學(xué)方法（二）病毒純化的方法1,病毒純化方法的依據(jù)(1)病毒顆粒具有一定的大小和密度，在離心場(chǎng)中能以一定的沉降速率沉降(2)病毒顆粒的主要化學(xué)組成為蛋白質(zhì)2.病毒純化的方法包括:超速離心,沉淀法,凝集技術(shù),液態(tài)兩相分配系統(tǒng),有機(jī)溶劑萃取,層析和電泳等三、病毒的測(cè)定（assayofvrvuses）病毒的測(cè)定即病毒的定量分析(一)病毒的物理

7、顆粒計(jì)數(shù)1.電鏡計(jì)數(shù)，將待測(cè)病毒樣品與已知數(shù)目的聚苯乙烯乳膠顆粒均勻混合后置電鏡觀察，統(tǒng)計(jì)病毒顆粒數(shù)目與乳膠顆粒數(shù)目，根據(jù)兩類顆粒數(shù)目之比即可計(jì)算出待測(cè)樣品中的病毒顆粒數(shù)目。2.血細(xì)胞凝集試驗(yàn)血細(xì)胞凝集作用（Hemagglution）許多動(dòng)物病毒的包膜蛋白或外殼蛋白在一定條件下（溫度、pH、離子濃度等）能引起體外的一定種類的脊椎動(dòng)物紅血球細(xì)胞凝集，此即血細(xì)胞凝集作用。血細(xì)胞凝集試驗(yàn)由于具有血凝性質(zhì)的病毒所能凝集血細(xì)胞的量與病毒濃度成正比，根據(jù)這一原理設(shè)計(jì)的血細(xì)胞凝集試驗(yàn)即可用于病毒定量測(cè)定。待測(cè)病毒樣品2倍稀釋1:11:101:201:4

8、01:801:1601:3201:6401:12801:2560每孔分別加入等體積一定濃度的紅球血細(xì)胞置室溫孵育一定時(shí)間觀察結(jié)果并計(jì)算病毒血凝效價(jià)（二）病毒的感染性測(cè)定（assayofvira