資源描述：
《《色譜知識(shí)介紹》PPT課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、HPLC色譜知識(shí)及應(yīng)用反相分配色譜極性:固定相<流動(dòng)相固定相-非極性流動(dòng)相(甲醇,乙腈）-極性非極性物質(zhì)后出峰正相吸附色譜極性:固定相>流動(dòng)相固定相-極性流動(dòng)相(己烷,庚烷)-非極性極性物質(zhì)后出峰正相色譜20%反相色譜80%正相&反相色譜硅膠基質(zhì)-pH3~8Al2O3.nH2O-pH1~14聚合物基質(zhì)-pH1~14高或低pH下,硅膠會(huì)溶解化學(xué)修飾困難孔結(jié)構(gòu)復(fù)雜,孔徑不均勻?qū)е轮Р粔蚋?有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物基質(zhì)溶漲而受損柱填料基質(zhì)硅膠純度?填料硅膠的純度與殘留金屬離子濃度色譜柱尺寸?填料床的長(zhǎng)度
2、和內(nèi)徑顆粒形狀?球型或不規(guī)則型粒徑?平均顆粒直徑,通常3-10μm表面積?顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和,以m2/gram表示孔徑?顆粒的孔或腔的平均尺寸,范圍80-300?色譜柱物理性質(zhì)C-18柱---性能影響因素鍵合類型?單體鍵合-鍵合相分子與基體單點(diǎn)相連?聚合體鍵合-鍵合相分子與基體多點(diǎn)相連碳覆蓋率?鍵合相的鍵合量常用含碳量(C%)來表示，也可以用覆蓋度來表示。所謂覆蓋度是指參與反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例。封端?鍵合步驟之后,用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來色譜柱化學(xué)性質(zhì)C-
3、18柱---性能影響因素A類硅膠OriginalZORBAXSIL(1970s)由于帶負(fù)電荷的殘留硅羥基和酸性表面上金屬含量高(硅羥基的pKa低),導(dǎo)致堿性化合物發(fā)生拖尾B類硅膠(高純)ZORBAXRx-Sil(1987)由于金屬含量低,硅羥基pKa高,堿性化合物不發(fā)生拖尾C-18柱---性能影響因素色譜柱尺寸---對(duì)色譜分離的影響?短柱(15-100mm)-運(yùn)行時(shí)間短,柱壓低?長(zhǎng)柱(150-250mm)-分辨率高,運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)?窄徑柱(?2.1mm)-檢測(cè)器靈敏度高?寬徑柱(3-21.2mm)-載
4、樣量高C-18柱---性能影響因素顆粒形狀---對(duì)色譜分離的影響當(dāng)使用黏度較大的流動(dòng)相50:50=MeOH:H2O時(shí),球型顆?？梢越档椭鶋?延長(zhǎng)色譜柱壽命C-18柱---性能影響因素球形不規(guī)則形粒徑---對(duì)色譜分離的影響較小的顆粒柱效較高,但會(huì)引起柱壓過高.3.5μm粒徑的常用于分離復(fù)雜的多組份樣品,而組份單一的樣品多采用5μm的粒徑1.8μm3.5μ5μm7μm10μm表面積---對(duì)色譜分離的影響高表面積對(duì)于多組份樣品的分離具有較強(qiáng)的保留能力,柱容量和分離度.表面積低的填料通常能迅速達(dá)到平衡狀態(tài)
5、,對(duì)于梯度淋洗尤為重要C-18柱---性能影響因素孔徑---對(duì)色譜分離的影響大孔的填料顆?？梢匝娱L(zhǎng)溶質(zhì)大分子在填料表面滯留的時(shí)間,達(dá)到充分分離,改善峰形樣品MW?4,000,選擇80?的孔徑樣品MW>4,000,選擇300?的孔徑鍵合類型---對(duì)色譜分離的影響單齒鍵合：提高傳質(zhì)速率,加快色譜柱平衡雙齒鍵合：增加色譜柱穩(wěn)定性,增加色譜柱的載樣量C-18柱---性能影響因素CHCHCHCHCHCHOSiOOOOSiSiSiCHCHCHCHCHCHSi333333333333SiSiOOSiSiOO碳覆
6、蓋率---對(duì)色譜分離的影響高碳覆蓋率：提高分辨率,分析時(shí)間長(zhǎng)低碳覆蓋率：縮短運(yùn)行時(shí)間封端---對(duì)色譜分離的影響封端：減輕待測(cè)組份與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象對(duì)于極性樣品,未封端與經(jīng)過封端處理的色譜柱在選擇性上有明顯差異C-18柱---性能影響因素固定相鍵合二甲基硅烷封端四甲基硅烷SiOOHOOCH3SiRCH3CH3SiCH3CH3SiRCH3R=C8,C18,etc.OOHOHOCH3SiRCH3CH3SiRCH3++ClCH3SiCH3CH3OHOHOHOHCH3ClR
7、CH3(TMS)傳統(tǒng)鍵合及封端技術(shù)鍵合相種類化學(xué)鍵合相按鍵合官能團(tuán)的極性分為極性和非極性鍵合相兩種。極性鍵合相：氰基(-CN)、氨基(-NH2)和二醇基(DIOL)——常用作正相色譜，極性強(qiáng)的組分保留值較大。極性鍵合相有時(shí)也可作反相色譜的固定相。非極性鍵合相：各種烷基(C1~C18)和苯基、苯甲基，極性弱的組分保留值較大。HPLC---色譜柱與pH的關(guān)系StableBondC18pH1~8Bonus-RPpH2~9ExtendC18pH2~11.5EclipseXDBC18pH2~9（可用于100
8、%全水相）未封端雙封端三封端雙封端HPLC---保留值與pH的關(guān)系pH變化值0.1RS變化值1.6色譜柱：ZorbaxStableBondC184.6X250mm,5um流動(dòng)相：27%甲醇：73%磷酸pH2.5&2.6溫度：500C流速：1.0mL/min.鄰氯苯胺（pKa＝2.636)12346750123456Time(min)01234561234675Time(min)pH7.00pH7.25色譜柱:ZORBAXEclipseXDB-C84.6x75mm,3.5μm流動(dòng)相:
