核果類果樹上李壞死環(huán)斑病毒和李矮縮病毒的血清學(xué)與RT-PCR檢測

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1、3．ThetotalRNAwasextractedfromsomesamplesshowingpositivereactionforPNRSVandPDVinbothPAS-ELISAandbiologicalindexingandusedastemplatesforReverseTranscriptionPolymeraseChmnReaction(RT-PCR)．PrimerstargetingtospecificsitesofcpgenesofbothPNRSVandPDVwereusedforRT-PCRdetectionofthesetwoviruses．Thetargetprod

2、uctswithexpectedsizes449bpforPNRSVand172bpforPDVwereamplifiedfroma11testedsamples．Keywords：stonefruittree；virus；biologicalindexing；PNRSVPDV；PAS．ELISA；ImPCR3縮略詞表4華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書學(xué)位論文乃如需保密，解密時(shí)間年月日是否保密獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得華中

3、農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意。研究生簽名：閑真帆加夠年多月侈日學(xué)位論文使用授權(quán)書本人完全了解華中農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷版和電子版，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，并授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所和北京萬方數(shù)據(jù)股份有限公司將本人學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位

4、論文全文數(shù)據(jù)庫》，并進(jìn)行信息服務(wù)(包括但不限于匯編、復(fù)制、發(fā)行、信息網(wǎng)絡(luò)傳播等)，同時(shí)本人保留在其他媒體發(fā)表論文的權(quán)力。注：保密學(xué)位論文(即涉及技術(shù)秘密、商業(yè)秘密或申請專利等潛在需要提交保密的論文)在解密后適用于本授權(quán)書。學(xué)位論文作者簽名：占迥鳥導(dǎo)師簽名：t駕尹，釤簽名日期：矽豸年6月『，扣簽名日期：口沙孵歹月，歲日注：請將本表直接裝訂在學(xué)位論文的扉頁和目錄之間1文獻(xiàn)綜述1．1李壞死環(huán)斑病毒和李矮縮病毒的基本特征1．1．2李壞死環(huán)斑病毒和李矮縮病毒的危害李壞死環(huán)斑病毒(Prunusnecroticringspotvirus，PNRSV)是分布較廣，經(jīng)濟(jì)上比較重要的的李屬病毒。在1932年，V

5、aUeaw首次報(bào)道了該病毒。Fulton(1970)、Kirkpatrick(1967)報(bào)道該病毒可以為害扁桃、杏、櫻桃、桃、李等多達(dá)21個(gè)屬的雙子葉植物。PNRSV可以造成核果類果樹芽和根的壞死，植株生長減慢，果實(shí)產(chǎn)量減少，葉片會(huì)出現(xiàn)褪綠、內(nèi)卷等癥狀，植株矮化，甚至整株枯死，在部分核果類果樹會(huì)表現(xiàn)出雜色花瓣。Bock(1967)報(bào)道PNRSV侵染甜櫻桃后產(chǎn)生粗縮花葉癥狀，侵染杏后產(chǎn)生白花葉癥狀，侵染玫瑰產(chǎn)生花葉癥狀，侵染蛇麻草后不顯示明顯癥狀。國外對PNRSV的危害研究起步較早，Manganaris等(2003)報(bào)道希臘北部的桃園幾乎所有的桃都感染了PPV，其中48％同時(shí)感染了PNRSV。

6、在我國，劉建等(1998)對桃紅葉病病原研究，PNRSV的地高辛標(biāo)記的cDNA探針與桃紅葉病葉提取的總核酸雜交，檢測到了特異性雜交點(diǎn)，證實(shí)了紅葉樣品中有PNRSV侵染。阮小風(fēng)等(1998)報(bào)道陜西甜櫻桃受到PNRSV的侵染，侵染率達(dá)到21．4％?？梢钥闯觯琍NRSV對核果類果樹造成了比較嚴(yán)重的危害作用。而且，PNRSV的危害作用的嚴(yán)重性因植物種類、培養(yǎng)品種、病毒株系、環(huán)境條件的不同而不同(MouryB，2000)。李矮縮病毒(Prunedwarfvirus，PDV)是另一種較重要的核果類果樹病毒，由Thomas和Hildebrand(1936)在美國首次報(bào)道。PDV可以造成核果類果樹葉片褪綠

7、、壞死、扭曲，植株矮縮、流膠等等。具體可表現(xiàn)新梢節(jié)間變短，葉片密集，葉片變小，葉色較綠或淡，葉緣上卷：花梗變短，花朵密集；有時(shí)果實(shí)畸形，產(chǎn)量降低。危害癥狀以春、夏兩季節(jié)最明顯。此外，與PNRSV不同的是，在較低的溫度條件下癥狀更明顯(RampitschC，1997)。而且PDV的危害癥狀隨寄主的種類和品種，病毒株系，以及溫度狀況等而表現(xiàn)出很大的差異。PDV對我國核果類果樹的危害在1996年有首次報(bào)道(陜西)。