侵染昆明玫瑰的李壞死環(huán)斑病毒的鑒定及其分子檢測(cè)

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1、維普資訊http://www.cqvip.com2007年第3期植物檢疫PLANTQUARANTINE侵染昆明玫瑰的李壞死環(huán)斑病毒的鑒定及其分子檢測(cè)李春艷丁元明‘何月秋趙明富秦紹釗(1云南省出入境檢驗(yàn)檢疫局昆明6502282云南農(nóng)業(yè)大學(xué))IdenlificalionandmoleculardetectionofPrtmusnecroticringspotvirusisolatedfromKunming.“Chunyan‘.DingYuanming‘,HeYueqiu2,ZhaoMingfu2,QinShaozhao2,(1Yunnan

2、Entry—ExitInspectionAndQuarantine,YunnanKunmlng650228,2YunnanAgriculturalUniversity,YunnanKunming650201)AbstractThevirescausinglOSemosaicdiseaseinKunmlngwasidentifiedasPrunusnecroticringspotvirus(PNRSV)thro~,hboththemolecularbiologytechnologyandthetraditionaltechnology.

3、Andthediameterofthisspherevirusis22—23nm.,I11eroseinfectedbytheviruspresentssystematicallymosaic。abnormalityandcfimple.,I11econcentrationoftheviresintheshoot,poHenandtopleavesarehighestcomparedwithotherpartsoftheplant.Andthenwiththeprim—ers,designedbasedontheconservativ

4、eregionofthePNⅣCP,wecangaina450bpfragment.While,thenestedRT—PCRWasalsoappliedtodetectthevireswiththepfimemCP1,CP2,P1andP2whichWasprovedtobethemostsen—sitivecomparedwithothertechniques.AndthesimilarityoftheCPsequencesbetweenthisPNRSVandtheknownspe—ciesis98.0%.whichconfir

5、medpathogenofthisdiseaseisPNRSV.KeywordsRose,Pmnnecroticringspotvirus,NestedRT—PCR摘要采集昆明地區(qū)種植的花葉癥狀明顯的玫瑰樣品,運(yùn)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)與常規(guī)技術(shù)相結(jié)合的方法,初步鑒定引起玫瑰花葉病的主要病毒病原為李壞死環(huán)斑病毒。該病毒引起玫瑰植株的系統(tǒng)花葉、畸形和皺縮等癥狀;電鏡下病毒粒體為球形,直徑為22~23nm;ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)該病毒在植株芽、花粉和頂部葉片的濃度最高;同時(shí),根據(jù)外殼蛋白的保守區(qū)利用Primer5.0設(shè)計(jì)該病毒的特異引物,對(duì)該病毒

6、進(jìn)行分子檢測(cè),得到450bp的預(yù)期DNA片斷,并在此基礎(chǔ)上,進(jìn)行了巢式RT—PCR的分子檢測(cè),表明巢式RT—PCR的檢測(cè)能力最強(qiáng)。并通過序列的同源性分析得知該病毒的外殼蛋白與已知PNRSV的同源性為98.0%,進(jìn)一步證明了該病毒為李壞死環(huán)斑病毒。關(guān)鍵詞玫瑰李壞死環(huán)斑病毒(PNRsV)巢式RT—PCR中圖分類號(hào)$41李壞死環(huán)斑病毒(Pnmu~necroticringspotvirus,斑,有研究表明PNRSV的濃度在一年的不同時(shí)期是PNRsV)屬雀麥花葉病毒科(Bromovifidae),等軸不穩(wěn)變化著的,且該病毒可以通過花粉傳播病原。

7、定病毒屬(Ilarvims)¨衛(wèi)J,是我國二類檢疫性病害。PNRSV在世界范圍內(nèi)廣泛分布,近年來國內(nèi)陜PNRSV寄主范圍廣,能自然和人工侵染的寄主達(dá)21西、山東、遼寧和北京等地陸續(xù)有該病毒病的報(bào)個(gè)科的雙子葉植物,180多種重要的花卉、果樹及蔬道_6娟j,其發(fā)病率一般在30%~66%以上,嚴(yán)重制約菜作物,引起植株壞死斑、落葉、黃化,甚至全株枯了我國尤其是我省玫瑰鮮切花的產(chǎn)量和質(zhì)量。近死等癥狀。主要侵染薔薇屬和李屬植物,如:玫瑰、兩年來,昆明地區(qū)種植的玫瑰發(fā)生花葉病,田間病月季、蘋果、李、桃、杏、櫻桃等n]。其危害作用的株矮化,葉片有明顯

8、的褪綠線狀和環(huán)狀斑,嚴(yán)重時(shí)嚴(yán)重性因植物種類、種植品種、病毒株系、環(huán)境條件系統(tǒng)發(fā)育受阻,葉片畸形,植株枯死。本文報(bào)道了的不同而不同_4]。在玫瑰上為褪綠色線狀和環(huán)狀從昆明地區(qū)種植的癥狀為花葉的玫瑰病株上的病收稿日期:2O0

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