《高速逆流色譜》PPT課件

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1、高速逆流色譜一、概述高速逆流色譜（High-SpeedCountercurrentChromatography,HSCCC）是一種連續(xù)高效的液-液分配色譜分離技術(shù)。該技術(shù)不需要固體支撐體，主要依據(jù)物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)的不同對物質(zhì)進行分離，相對其他常用色譜（如柱色譜、高效液相色譜等）來說，具有無不可逆吸附和回收率高的特點，特別適合于天然活性成分的分離。HSCCC技術(shù)最早是由美國國立衛(wèi)生院Ito博士研制應(yīng)用，我國對HSCCC技術(shù)應(yīng)用較早，HSCCC技術(shù)發(fā)展十分迅速，在過去20~30年中，出現(xiàn)了一系列新型的分離技術(shù)

2、，積累了大量的科研成果，自1995年以來，國外已有5本英文專著出版，我國目前也有兩本中文專著出版。二、HSCCC色譜工作原理HSCCC色譜包括儲液罐、泵、螺旋管分離柱、檢測器、色譜工作站或數(shù)據(jù)采集軟件或記錄儀以及餾分收集器等部分。選擇溶劑體系平衡選擇固定相充滿螺旋管柱高速旋轉(zhuǎn)螺旋管泵入流動相流動相流出，注入待分離的樣品收集餾分分離效果溶劑系統(tǒng)固定相流動相洗脫方式、流動相的流速儀器的旋轉(zhuǎn)方向和轉(zhuǎn)速樣品濃度和進樣方式柱溫等檢測器紫外-可見光檢測器蒸發(fā)光散射檢測器質(zhì)譜檢測器等http://video.sina.co

3、m.cn/v/b/18615566-1585286663.htmlhttp://video.sina.com.cn/v/b/18605037-1585286663.html與其它色譜分離技術(shù)相比，高速逆流色譜具有如下特點：分離效率高制備量大操作靈活回收率高應(yīng)用范圍廣分離成本低三、溶劑體系的要求1溶劑體系的種類弱極性溶劑體系中等極性溶劑體系強極性溶劑體系兩相由正己烷和水組成，可用甲醇、乙醇、醋酸乙酯等來調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性。典型的溶劑體系有：正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水中等極性溶劑體系的兩

4、相由氯仿和水組成，可以加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等來調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性。適合于黃酮類、蒽醌類、香豆素和一些極性較大的木脂素和萜類的分離。典型的溶劑體系是氯仿-甲醇-水（4：3：2）強極性溶劑體系的兩相基本物質(zhì)是正丁醇和水，可以加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等溶劑來調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，也可以在氯仿水體系中調(diào)節(jié)pH值來增大極性,或在異丁基甲醚水體系中加入適量的酸和堿.適合于極性很強的生物堿類化合物的分離。典型的溶劑體系:氯仿-甲醇-HCl異丁基甲醚-水（有機相加三乙胺，水相加鹽酸）2溶劑體系選擇的步驟（1）預(yù)測要分離物質(zhì)

5、的極性，粗選一個溶劑體系；（2）取少量樣品于上下相各2毫升的溶劑體系中，用TLC進行檢驗，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等來調(diào)節(jié)溶劑體系的極性，直到樣品在上下相中的分配比K為0.5~2為止；（3）用HPLC測定K值；（4）用分析型HSCCC進行預(yù)分離，再用制備型高速逆流色譜進行分離。（1）溶劑不造成樣品的分解或變性；（2）樣品在溶劑中有足夠高的溶解度；（3）樣品在溶劑系統(tǒng)中有合適的分配系數(shù)值；（固定相為管柱總體積的50%以上，分配系數(shù)為0.5~2）（4）固定相能實現(xiàn)足夠高的保留。3選擇溶劑時應(yīng)注意生物堿氯仿-甲醇

6、-NaH2PO4溶液(pH=4)溶劑體系氯仿-甲醇-鹽酸體系異丁基甲醚-四氫呋喃-水體系異丁基甲醚-水體系正己烷-乙醇-水體系正己烷-醋酸乙酯-水正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水4不同物質(zhì)的溶劑體系黃酮類化合物正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水正丁醇-醋酸乙酯-水氯仿-甲醇-水正己烷-醋酸乙酯-正丁醇-甲醇-醋酸-水正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水萜類異辛烷-乙酸乙酯-甲醇-水異辛烷-甲醇-水氯仿-甲醇-水木脂素和香豆素氯仿-甲醇-水正己烷-乙睛-醋酸乙酯-水正己烷-甲醇-水氯仿-甲醇-水四、應(yīng)用溶劑系統(tǒng)兩相溶劑系統(tǒng)：正己烷-乙

7、酸乙酯-乙醇-水（6：3：2：5），在分液漏斗中充分混合，臨用前將其分開。分離條件：室溫下，上相為固定相，下相為流動相，流速為0.7ml/min；洗脫方式：由首端向尾端洗脫；主機：正轉(zhuǎn)，流速為800r/min進樣:3.8mg/2ml；檢測：紫外檢測器，波長為220nm實驗結(jié)束時,用N2將固定相由首端向尾端推出,分別收集四份,色譜柱管用甲醇清洗兩次.