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1、豚鼠耳蝸電位實驗報告一、實驗目的①學習豚鼠耳蝸電位的記錄方法。②觀察耳蝸微音器電位及聽神經動作電位，并了解其產生機理。二、實驗原理聽覺的適應刺激是聲波。外界的聲波振動先經過外耳道、鼓膜和聽骨鏈傳到內耳，引起耳蝸中的內淋巴和基底膜振動，使毛細胞興奮產生去極化電位，然后再通過突觸傳遞使聽神經纖維末梢產生類似興奮性突觸后電位的局部電位和動作電位。當動作電位經聽神經傳導通路傳向皮層中樞時，則產生聽覺。在實驗條件下，從耳蝸中可記錄到四種電位變化：①耳蝸內電位（EP），②耳蝸微音器電位（CM），③總合電位（SP），④聽神經總合動作電位（CAP）。在短聲的刺激下，可記錄
2、到兩種明顯的電位變化，即耳蝸微音器電位（CM）及復合神經動作電位（CAP）。記錄耳蝸微音器電位和復合聽神經動作電位有三種方法：（1）將記錄電極放置在圓窗上，（2）將記錄電極直接插入耳蝸內，（3）將記錄電極插入顱骨表面的面神經孔內。本實驗采用方法（1）進行記錄。三、實驗動物與器材年幼豚鼠（體重300-400g、擊掌反應呈陽性），常用手術器械（豚鼠類），鐘表鑷子，絲鉆一套（鉆頭直徑:1mm、0.5mm及銹花針型），揚聲器，RM6240B生理信號采集處理系統(tǒng)，引導電極，手術冷光燈，20%氨基甲酸乙酯、紗布、棉球。四、實驗方法與步驟1.手術(1)用20%氨基甲酸乙
3、酯，按7.5ml/kg體重腹腔注射，將豚鼠麻醉。待動物沒有明顯掙扎反應后，剪凈一側耳廓四周的毛，腹位固定在解剖臺上。(2)沿耳廓根部的后上緣切開皮膚，剪掉耳廓，暴露耳道孔。用雙氧水或粗紗布將耳道孔上部及后部的頭骨上的皮膚及結蒂組織去除（注意:因皮膚較厚，去皮時要注意止血）。先找到頂間骨、顳骨與枕骨粗隆，然后沿枕骨外緣下行，用手指邊探摸顳骨的乳突部，邊做鈍性分離，充分暴露顳骨乳突。此乳突部位在枕骨粗隆的下方1.5cm左右，外耳道開口后方約0.5cm處。(3)用絲鉆在顳骨乳突靠近耳道孔處鉆一小孔（直徑約1mm）。此處骨質很薄，切勿用力過猛而插入鼓室過深，傷及耳
4、蝸。鉆孔后，用鐘表鑷子盡力將孔擴展，充分打開鼓室，以便暴露耳蝸。借助冷光燈照明，此時可見其耳蝸呈淡黃色，壁上有細的血管走行。耳蝸底圈在外，正圓窗在底圈上方，可見其膜，卵圓窗膜見不到。(4)借助冷光燈照明，將銀絲電極放置在圓窗上。2.測試電極安放將銀絲電極放置在圓窗膜上，記錄電極（紅）與銀絲電極相連，參考電極（綠）夾在耳廓皮膚創(chuàng)口上，地線（黑）插在背部皮膚上。3.RM624OB生理記錄系統(tǒng)參數(shù)設置刺激器選擇:同步觸發(fā)，單刺激，正電壓刺激，刺激強度3V，波寬0.1ms記錄通道參數(shù)設置。4.觀察短聲（方波）刺翠下引發(fā)的耳蝸微音器電位和聽神經動作電位。5.語音刺激
5、下，觀察觀察耳蝸微音器電位現(xiàn)象。16.深度麻醉下微音器電位和聽神經動作電位觀察。五、實驗數(shù)據(jù)及分析（1）正向、反相單刺激PositiveStim.200CM1000-100N2Response/μV-200CAP-300N1-40000.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0070.0080.0090.01Time/sNegativeStim.2001000CM-100N2CAPResponse/μV-200N1-300-40000.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0070.0080.0090.01Tim
6、e/sFig1如圖1所示，藍色箭頭表示刺激開始時刻。正相和負相單刺激均可明顯觀察到耳蝸微音器電位（CM）、復合動作電位（CAP）和N1、N2?？梢姸佄⒁羝麟娢粷摲跇O短，均小于0.3ms，且很忠實地記錄了刺激聲，因為正相刺激下CM的谷恰好對應了負相刺激下CM的峰。刺激聲反相時，N1、N2并不反相。（2）正相刺激，逐漸增大刺激強度我們以1V為步長，從1V到12V依次增加正相刺激強度。檢測的結果發(fā)現(xiàn)：當刺激強度在1V~5V時，隨著刺激的強度增加，耳蝸微音器電位越來越強，在刺激為5V時達到最強；當刺激強度等于6V時，微音器電位顯著變小，而大于6V時，微音器強度
7、與6V時基本類似，略微減弱。下面僅以4、5、6、12V等刺激的結果展示。22004V5V1006V12V0-100Response/μV-200-300-40000.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0070.0080.0090.01Time/sFig2（3）測定產生聽神經動作電位的刺激閾值及此時耳蝸微音器電位的閾強度2001000-100Response/μV0.4V-2000.5V0.6V3V-3000.1V0.2V-40000.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0070.0080.0090.01Ti
8、me/sFig3如圖3所示，我們從0.1V起給刺激聲，步長為0.1
