《固定化酶試驗(yàn)》PPT課件

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1、基本要求1.制作固定化α-淀粉酶。2.進(jìn)行淀粉水解的測(cè)定。發(fā)展要求通過(guò)此實(shí)驗(yàn)探討固定化酶的應(yīng)用價(jià)值。實(shí)驗(yàn)原理固定化酶就是將水溶性的酶用物理或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上，使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。介質(zhì)本身是不溶于水。固定化酶的優(yōu)點(diǎn)管道化、連續(xù)化、自動(dòng)化酶不溶解在催化反應(yīng)的溶液中，產(chǎn)物更易純化可反復(fù)使用可較長(zhǎng)時(shí)間地貯存和使用固定化酶的固定方法吸附法偶聯(lián)法交聯(lián)法包埋法吸附法物理吸附法酶蛋白分子吸附在惰性載體（不引起變性且能保持酶活力的載體）離子交換法利用蛋白質(zhì)分子上帶電荷基團(tuán)（氨基、羧基）與離子交換劑形成離子鍵，再被交換結(jié)合至載體上優(yōu)點(diǎn)：適用的酶范圍廣，酶

2、活性高缺點(diǎn)：酶與載體的結(jié)合力較弱，酶容易脫落偶聯(lián)法（載體偶聯(lián)法、共價(jià)偶聯(lián)法）酶蛋白上的一些基團(tuán)（如羧基、巰基、咪唑基等）能在溫和條件下與載體共價(jià)結(jié)合，從而被固定化。結(jié)合部位必須不是酶的活性中心，也不是維持其空間結(jié)構(gòu)的必需基團(tuán)。優(yōu)點(diǎn)：結(jié)合穩(wěn)定，適用范圍廣缺點(diǎn)：操作復(fù)雜，條件不夠溫和，酶活性較低交聯(lián)法交聯(lián)法是指通過(guò)雙功能試劑，將酶和酶聯(lián)結(jié)成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的方法。結(jié)合部位也不是酶的活性中心，也不是維持其空間結(jié)構(gòu)的必需基團(tuán)。優(yōu)缺點(diǎn)與偶聯(lián)法基本相同包埋法包埋法是將酶蛋白包埋在凝膠交聯(lián)后的“格子”中優(yōu)點(diǎn)：適用范圍不廣，酶活性高，穩(wěn)定性也較高。α-淀粉酶的固定化實(shí)驗(yàn)載體：石英砂固

3、定原理：吸附法（物理吸附法）淀粉：遇碘藍(lán)色（經(jīng)α-淀粉酶催化）糊精：遇碘紅色（經(jīng)β-淀粉酶催化）麥芽糖：遇碘不變色（棕黃色）（經(jīng)糖化淀粉酶、麥芽糖酶催化）葡萄糖Ps：碘液是KI-I2的溶液淀粉酶和石英砂混合后，攪拌30min。加入注射器后，用大于10倍體積的蒸餾水洗滌注射器以除去未吸附的游離淀粉酶。確定洗滌后收集到的液體中不再含有淀粉酶放盡剩余的蒸餾水后關(guān)閉液體閥控制流速加入可溶性淀粉溶液和收集反應(yīng)后的溶液。檢測(cè)反應(yīng)效果。經(jīng)過(guò)固定化酶柱的淀粉溶液淀粉溶液