實驗五用大腸桿菌生長曲線的測定

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1、大腸桿菌生長曲線的測定水、環(huán)境中微生物的測定林親雄閻春蘭李曉華了解光電比濁計數(shù)法的原理。學(xué)習(xí)、掌握光電比濁計數(shù)的操作方法。通過細菌數(shù)量的測量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長曲線。實驗31大腸桿菌生長曲線的測定一、實驗?zāi)康纳L曲線將少量純種單細胞微生物接種到定量的液體培養(yǎng)基中，定時取樣測定細胞數(shù)量，以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以菌數(shù)為縱坐標(biāo)作圖，得到一條反映單細胞微生物在整個培養(yǎng)期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線。二、實驗原理一個典型的生長曲線分為延緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個時期微生物數(shù)量的測定方法稀釋平板計數(shù)法顯微鏡直接計數(shù)法最大概率法光電比濁法

2、稀釋平板計數(shù)法對樣品稀釋培養(yǎng)，據(jù)形成的菌落數(shù)計數(shù)。優(yōu)點：活菌計數(shù)方法，對設(shè)備要求不高。缺點：操作復(fù)雜。顯微鏡直接計數(shù)法使用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)。優(yōu)點：操作簡便，計數(shù)直觀。缺點：計數(shù)結(jié)果為活細菌和死菌體的總和。最大概率法待測菌液經(jīng)十倍系列稀釋，每稀釋度做3-5個重復(fù)，經(jīng)培養(yǎng)后，檢查細菌的生長，以有細菌生長的最后三個稀釋度的管數(shù)作數(shù)量指標(biāo)，由數(shù)理統(tǒng)計表查出近似值，再乘以數(shù)量指標(biāo)第一位的稀釋倍數(shù)，即為原菌液中的菌數(shù)。最大概率法例如：某細菌在稀釋培養(yǎng)法中生長情況如下：稀釋度：10-310-410-510-610-710-8重復(fù)數(shù)：555555

3、有菌生長管數(shù)：555410根據(jù)上述結(jié)果，數(shù)量指標(biāo)為“541”，查表得近似值為17，乘以第一位數(shù)的稀釋倍數(shù)，得出原始培養(yǎng)物的活菌數(shù)=17×105個優(yōu)點：活菌計數(shù)，適用于特殊細菌。缺點：計數(shù)結(jié)果為概值。光電比濁法光電比濁法是利用在一定的范圍內(nèi)，微生物細胞濃度與透光度成反比的原理。當(dāng)細菌細胞在溶液中數(shù)量越多，濁度越大，在光電比色計中測定時所吸收的光線越多。優(yōu)點：簡便快速，適合于自動控制。缺點：測定結(jié)果受培養(yǎng)液成分影響；某些樣品樣品不適合用此法。菌種培養(yǎng)不同時段的大腸桿菌。儀器或其他用具分光光度計，比色皿等。三、實驗器材開電源，儀器預(yù)熱20min，將

4、波長調(diào)至600nm處。打開樣品室，將擋光體插入比色皿架，將其推或拉入光路。蓋好樣品室蓋，在TMODE下，按0%T鍵調(diào)零透射比。取出擋光體，按100%T/OA鍵調(diào)100%透射比。四、實驗步驟1.樣品測試前的調(diào)試2.樣品測定將參比溶液（未接種的LB液體培養(yǎng)基）以及被測溶液倒入比色皿中。打開樣品室蓋，將參比溶液放在樣品架的第一個槽位中，將被測溶液依次放入其它槽位。將參比溶液推入光路，按100%T/OA鍵調(diào)滿度。按MODE，將測試方式調(diào)至吸光度方式（A）。此時,顯示器顯示“0.000”。將被測溶液推入光路，顯示器顯示為被測樣品的吸光值。在600nm波

5、長下，用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對照，分別對培養(yǎng)了0、4、8、12、16和20h的大腸桿菌培養(yǎng)液，進行光電比濁測定。對于高濃度的大腸桿菌培養(yǎng)液,要用未接種的LB培養(yǎng)基進行稀釋，使其吸光值在0.1-0.65范圍內(nèi)。比色皿經(jīng)蒸餾水清洗后，必須經(jīng)待測樣品潤洗。比色皿的毛面用吸水紙擦干，而光面只能用吸水紙吸干，以免光面被劃破。比色皿之間吸光度進行比較。四、實驗結(jié)果記錄不同大腸桿菌培養(yǎng)液的OD600值，并繪制大腸桿菌的生長曲線。培養(yǎng)時間（h）4812162024光密度值OD600五、思考題光電比濁計數(shù)的原理是什么？這種計數(shù)法有何優(yōu)缺點？如果用活菌計

6、數(shù)法制作生長曲線，你認為會有什么不同？兩者各有什么優(yōu)缺點？比較不同場所和不同條件下細菌的數(shù)量和類型。觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征。體會無菌操作的重要性。掌握水和環(huán)境中微生物的測定方法。檢測污染水域微生物的類型和數(shù)量。實驗67水、環(huán)境中微生物的測定一、實驗?zāi)康膽?yīng)用平板菌落計數(shù)技術(shù)測定污染水的細菌總數(shù)。由于細菌種類繁多，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使所有的細菌均能生長繁殖。因此，計算出來的細菌總數(shù)僅是一種近似值。利用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基可以大致測定不同環(huán)境中存在的微生物。二、實驗原理樣品的采取自來水取自自來水管道。橙汁購于超市?？?/p>

7、腔、人民幣、門把手和實驗環(huán)境中的微生物。南湖水距水面10-15cm的深層水樣。培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。儀器或其他用具滅菌培養(yǎng)皿，無菌槍頭，涂棒等。三、實驗器材無菌操作采用10-1，10-2，10-3稀釋液涂布牛肉膏蛋白胨平板;每個稀釋度2個重復(fù)。N-乙酰葡糖胺四、實驗步驟1.南湖水中微生物的測定每個培養(yǎng)皿加0.1ml稀釋液(LTA)2.口腔、人民幣和門把手微生物的測定用棉簽分別從牙周、人民幣紙幣和門把手表面挑取微生物，然后放入裝有0.5ml無菌水的EP管中，顛倒均勻后，用移液器全部吸入牛肉膏蛋白胨平板中，涂布均勻。3.實驗室空氣中微生物

8、的測定將牛肉膏蛋白胨平板蓋揭開，分別置實驗臺10，20，30，40，50，60min后，蓋上皿蓋，倒置培養(yǎng)。4.自來水、橙汁中微生物的測定取1ml涂布牛肉膏蛋白胨平