大腸桿菌生長曲線的測定.ppt

《大腸桿菌生長曲線的測定.ppt》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在PPT專區(qū)-天天文庫。

1、大腸桿菌生長曲線的測定授課教師:孫運(yùn)軍研究生:何浩張晨黃同龍左明星目的要求1、通過光密度值的測量了解大腸桿菌的生長規(guī)律，繪制生長曲線。2、了解光電比濁法測量細(xì)菌數(shù)量的原理?；驹韺⒁欢康募?xì)菌接種到恒容積的液體培養(yǎng)基中，在適宜的培養(yǎng)條件下，該群體就會有規(guī)律的增長。以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以細(xì)胞數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長曲線。該曲線包括四個階段：延滯期、指數(shù)期、穩(wěn)定期、衰亡期。本實(shí)驗(yàn)采用分光光度計進(jìn)行光電比濁測定不同培養(yǎng)時間細(xì)菌懸浮液的光密度值，繪制生長曲線。光吸收的基本定律：朗伯－比耳定律A=kbc(k為摩爾吸光系數(shù)，b為液層厚

2、度，c為溶液濃度)朗伯－比耳定律的意義是：當(dāng)一束平行單色光通過均勻、非散射的溶液時，其吸光度與溶液濃度和液層厚度的乘積成正比。FeSO4溶液在650nm的光吸收曲線大腸桿菌懸浮液的光吸收規(guī)律：實(shí)驗(yàn)表明，OD600在0.1~0.65之內(nèi)的大腸桿菌懸浮液基本符合朗伯－比耳定律，即吸光度與菌液濃度成正比。大腸桿菌梯度稀釋液的光吸收曲線器材1、菌種：大腸桿菌。2、培養(yǎng)基：LB液體培養(yǎng)基。3、儀器與耗材：722型分光光度計、恒溫?fù)u床、無菌試管、無菌吸管。操作步驟1、配制LB液體培養(yǎng)基100ml，分裝1支試管(5ml/支)，剩余培養(yǎng)基裝入250ml的三角瓶，121℃滅菌2

3、0min。2、取11支無菌大試管，用記號筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時間，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。3、用5ml無菌吸管取2.5ml大腸桿菌培養(yǎng)液(培養(yǎng)12h)轉(zhuǎn)入裝有LB液體培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)，混勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無菌大試管中。4、將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(200rpm)，在相應(yīng)時間取出試管放于冰箱中，最后一同測定OD600值。5、進(jìn)行光密度測定時，以未接種的LB液體培養(yǎng)基為空白對照，從早取出的培養(yǎng)液開始依次測定，細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基稀釋后測定，使OD600值在0.1~0.65之內(nèi)。不同培養(yǎng)

4、時間的菌液注意事項：選用規(guī)格一致的試管；每支試管的裝液量應(yīng)相同(5ml/支)；混勻的菌懸液加入到比色皿后應(yīng)迅速讀取OD值；保護(hù)比色皿透光面不受磨損，不要用手指直接接觸；分光光度計在未測樣品時應(yīng)及時打開蓋。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、將測定的OD600值填入下表：培養(yǎng)時間(h)對照01.534681012141620OD6002、繪制大腸桿菌的生長曲線：OD600值培養(yǎng)時間/hLB液體培養(yǎng)基配方：100ml酵母提取物(Yeastextract):0.5g蛋白胨(Tryptone)：1g氯化鈉(Nacl)：1gThanksforyourattention！