兔子免疫血清和無免疫血清

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1、兔子免疫血清和無免疫血清成分分析比較作者：鐘園園、鄭曉陽目錄前言材料、儀器設(shè)備與方法結(jié)果分析討論與總結(jié)前言血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學(xué)成分組成,這些化學(xué)成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。動(dòng)物在生命活動(dòng)過程中常常會(huì)受到病原微生物的侵襲而發(fā)病甚至死亡。為了防止動(dòng)物發(fā)生傳染性疾病,所以常常對其進(jìn)行免疫接種。動(dòng)物獲得免疫能力對自身生理有什么影響，這是一個(gè)值得研究的方向。本實(shí)驗(yàn)主要是粗略地測量血清中的成分在免疫后與無免疫中的含量變化，從宏觀上

2、把握免疫對血清成分含量的影響。前言血清總膽固醇測定是血脂分析的常規(guī)項(xiàng)目,目前國內(nèi)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室的常用方法有酶法、硫酸一磷酸一高鐵顯色法、硫酸一醋醉直接顯色法、硫酸一醋酥煮沸顯色法及鄰苯二甲醛一硫酸顯色法和鄰苯二甲醛法等。本實(shí)驗(yàn)我們采用的是鄰苯二甲醛法。其在臨床上的意義：血清中總膽固醇的濃度可作為脂類代謝的指標(biāo)，但脂類代謝又常與糖類及激素的代謝密切相關(guān)，故在其他物質(zhì)代謝異常時(shí)亦可影響血清總膽固醇的濃度。前言血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力的測定為一種較好的早期診斷肝炎的方法之一。其在臨床上有重要意義：正常時(shí)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶主要存在于組織細(xì)胞內(nèi)，以肝細(xì)胞含量最多，心肌細(xì)胞中含

3、量其次，只有極少量釋放入血中。所以血清中此酶活力很低。當(dāng)肝臟、心肌病變、細(xì)胞壞死或通透性增加時(shí)，細(xì)胞內(nèi)各種酶釋放出來，使血清中此酶活性升高。所以測定血清中此酶的含量可作為診斷、鑒別診斷及預(yù)后觀察的依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)采用紙層析法和比色法探究動(dòng)物免疫對血清成分含量的影響。前言分離、純化與鑒定γ—球蛋白的方法很多，本實(shí)驗(yàn)用醋酸纖維素膜電泳法對蛋白質(zhì)進(jìn)行量化、比較及特性鑒定，是較為經(jīng)濟(jì)、快速且可重復(fù)的方法。本次血清清蛋白與γ-球蛋白的分離與鑒定覆蓋了傳統(tǒng)生化技術(shù)，包括離心技術(shù)、層析技術(shù)、分光光度法和電泳技術(shù)。1.1材料來源及處理4號血清：由生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院生化試驗(yàn)

4、室提供。從四只兔子分別提取血清用于生化實(shí)驗(yàn)，其中有一只兔子是有免疫的，其它的是未免疫的，血清提取出后置于冰箱冷藏。（血清主要由水和各種化學(xué)成分組成,這些化學(xué)成分就包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉(zhuǎn)氨酶。大量實(shí)驗(yàn)證明將血清密封放入-10℃冰箱中長時(shí)間保存,由于水分和這些化學(xué)成分沒有變化,因此新鮮血清和-10℃保存一年的血清醋酸纖維素薄膜電泳后的血清白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白的百分值無顯著差異,兩種血清的甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉(zhuǎn)氨酶也無明顯差異。完全能滿足實(shí)驗(yàn)的要求。這不僅不浪費(fèi)血清,而且方便又節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)）。豬肝

5、：由生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院生化試驗(yàn)室提供。幾天前從菜市場買來置于冰箱里保鮮處理，到要用時(shí)取出（同上，冷藏對谷丙轉(zhuǎn)氨酶影響不大）。1.2儀器與設(shè)備1.2.1凝膠柱及架1.2.230℃、37℃水浴箱1.2.3定時(shí)器1.2.4微量進(jìn)樣器1.2.5分光光度計(jì)1.2.6透析袋1.2.7電爐1.2.8電子天平1.2.9水浴鍋1.2.10離心機(jī)1.2.11準(zhǔn)確的加樣器1.4方法1.4.1血清膽固醇的定量測定：鄰苯二甲醛法1.4.2血清清蛋白與γ-球蛋白的分離與鑒定：鹽析法分離提純蛋白質(zhì)、透析法脫鹽與蛋白質(zhì)濃縮、凝膠過濾層析、醋酸纖維素薄膜電泳法分離與鑒定血清清蛋白1.4

6、.3谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的鑒定及活力單位的測定：紙層析法、分光光度法測定血清丙轉(zhuǎn)氨酶的活力結(jié)果分析2.1.1血清總膽固醇的含量圖1血清總膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2兔子血清總膽固醇含量由圖2可知免疫兔子血清中膽固醇含量比未免疫的兔子低很多樣品吸光度膽固醇含量/mg不免疫兔子血清0.09837.3免疫兔子血清0.0161.652凝膠層析洗脫結(jié)果圖3凝膠層析洗脫曲線圖由圖3可知藍(lán)色的藍(lán)葡聚糖比黃色的重鉻酸鉀先流過凝膠柱，且藍(lán)葡聚糖在第10管，即約流出197ml時(shí),達(dá)到溶質(zhì)數(shù)最大,即濃度最大；重鉻酸鉀在第24管，即約流出473ml時(shí)達(dá)到溶質(zhì)數(shù)最大全血清、清蛋白和γ-球蛋白電

7、泳結(jié)果純化的γ-球蛋白樣品為一條帶（γ-球蛋白位置），正常兔子血清樣品為五條帶（清蛋白、α1、α2、β及γ-球蛋白）上清液的遷移距離=2.50cmγ-球蛋白的遷移距離=1.57cm全血清中：α-球蛋白的遷移距離=1.52cmβ-球蛋白的遷移距離=2.10cmγ-球蛋白的遷移距離=2.50cm上清液的遷移距離=2.78cm圖4全血清、清蛋白和γ-球蛋白電泳譜圖兔子血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力單位測定圖5A520nm下酶活力單位的標(biāo)準(zhǔn)曲線對照未免疫兔子4號免疫兔子分光度00.0850.112GPT單位（100ml）066.1196.11由右表可知免疫兔子血清中酶

8、活力單位比未免疫的大圖6紙層析結(jié)果圖2．2討論與總結(jié)血清成分的變化能夠?qū)ρ嘿|(zhì)量產(chǎn)生重要影響。