免疫血清的制備.ppt

《免疫血清的制備.ppt》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、免疫血清的制備目的要求熟悉免疫血清制備的過程了解動物實驗的基本知識原理將抗原物質(zhì)經(jīng)適當(dāng)途徑，按照預(yù)先制定的免疫方案免疫動物，經(jīng)過一定時間，可刺激機(jī)體產(chǎn)生特異抗體并釋放入血液，當(dāng)血中抗體達(dá)到一定效價時采血，分離血清，即為特異性免疫血清（又稱為抗血清）。因抗原具有多種表位，可激活多個克隆的B細(xì)胞活化產(chǎn)生抗體，因此，這種免疫血清又稱為多克隆抗體。本實驗以綿羊紅細(xì)胞（SRBC）作為免疫原，以家兔為免疫動物，制備兔抗養(yǎng)紅細(xì)胞免疫血清（也稱為溶血素）原理適當(dāng)?shù)耐緩健⒎椒ㄒ欢〞r間原理優(yōu)質(zhì)免疫血清的產(chǎn)生主要取決于：（一）、抗原的純度和免疫原性（二）、動物應(yīng)答的能力以

2、及免疫程序免疫程序影響因素：免疫途徑、抗原劑量、注射次數(shù)、時間間隔、有無佐劑等因素。適當(dāng)?shù)耐緩?、方法一定時間材料1.動物健康成年家兔，雄性，體重2-3kg；健康成年綿羊。2.試劑生理鹽水、碘酒、75%酒精。3.器材剪刀、鑷子、無菌注射器、量筒、無菌毛細(xì)滴管、無菌試管、離心管、三角燒瓶（200ml）、動物固定架、手術(shù)器械一套、塑料放血管等。阿氏液（Alsever'sSolution）阿氏液是一種紅細(xì)胞保存液，含有抗凝劑檸檬酸鈉和細(xì)胞需要的養(yǎng)分葡萄糖。阿氏液配方如下：　　葡萄糖2.05克　　檸檬酸鈉0.8克　　檸檬酸0.055克　　氯化鈉0.42

3、克　　加蒸餾水至100毫升，加熱溶解后將pH值調(diào)到6.1，高壓滅菌，放置在4℃?zhèn)溆?。方?兔抗羊紅細(xì)胞免疫血清（溶血素）的制備1.抗原制備（1）用碘酒和75%消毒綿羊皮膚，抽取頸靜脈血液，注入含有等量阿氏液的三角燒瓶內(nèi)，混勻。阿氏液既有抗凝作用，又適于儲存SRBC。分裝后置4℃冰箱內(nèi)，可使用3周。（2）無菌取上述綿羊血于離心管中，用無菌生理鹽水洗滌紅細(xì)胞，2000r/min，離心5min，吸棄上清液和白細(xì)胞層，再用無菌生理鹽水與SRBC混勻，2000r/min，離心5min，重復(fù)3次。最后一次離心10min，以使血細(xì)胞沉積于管底，棄去上清液。（3）

4、根據(jù)紅細(xì)胞積壓，用生理鹽水配成20%SRBC懸液。2.免疫動物（1）全班分為4組，每組選擇健康雄性兔1只，用于免疫。（2）用全血和SRBC懸液按下述方案免疫兔子。免疫日期第1天第3天第5天第7天第12天第15天注射途徑皮內(nèi)皮內(nèi)皮內(nèi)皮內(nèi)耳靜脈耳靜脈免疫原全血全血全血全血20%懸液20%懸液劑量(ml)0.51.02.01.01.02.0（3）試血末次注射后第7天，耳靜脈采血1ml,分離血清，用試管凝集試驗滴定效價。（1：2000以上可用）3、分離血清（1）頸動脈放血（心臟采血）并收集于無菌三角燒瓶中凝固后4℃冰箱過夜，分離上層血清。然后2500r/mi

5、n離心10min，收集收集上層血清。（2）收集的血清經(jīng)鑒定純化后，小量分裝，-20℃凍存。