《酶活力及酶》ppt課件

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1、第三節(jié)酶活力及酶動力學(xué)一、酶活力1、酶活力的測定酶活力的表示方法:酶活力：是指酶催化某以化學(xué)反應(yīng)的能力，可用在一定條件下酶催化某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速度來表示，即單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量來表示，一般用單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物生成量來表示。V=[S]/t和V=[P]/tU（酶活力）單位：表示酶量的多少，酶活力單位與所采用的測定方法，反應(yīng)條件等因素有關(guān)。國際酶學(xué)會提出使用統(tǒng)一的國際單位IU，即最適條件下25℃，每分鐘催化1微摩爾底物所需要的酶量。2、酶的比活力比活力=活力單位系數(shù)/每毫克酶蛋白是表示酶純度

2、的一個指標(biāo)。3、酶轉(zhuǎn)換系數(shù)表示酶的催化中心，每個活性中心或酶分子底物轉(zhuǎn)換底物的分子數(shù)。4、酶活力的測定：比色法：產(chǎn)物與試劑生成有色物質(zhì)，根據(jù)顏色深淺來計(jì)算。分光光度法：底物和產(chǎn)物光吸收性質(zhì)不同，可根據(jù)吸收光譜的變化來計(jì)算。滴定法：產(chǎn)物之一是酸或堿可以使用此法。量氣法。同位素測定法。酶聯(lián)法：S+ESE1D+E2DE2FD：不能檢測或不容易檢測F：容易檢測旋光法量熱法層析計(jì)算題1、有1克淀粉酶制劑，用水溶解成1000毫升，從中取出1毫升測定淀粉酶活力，測得每5分鐘分解0.25克淀粉。計(jì)算每克酶制劑所含

3、的淀粉酶活力單位。（淀粉酶活力單位的定義是：最適條件下每小時(shí)分解1克淀粉的酶量稱為1個活力單位。）解：1、由題可知，1/1000克的淀粉酶能在5分鐘內(nèi)分解0.25克淀粉，1小時(shí)內(nèi)1/1000克的淀粉酶能分解的淀粉為：0.25×（60/5）=3克；2、由淀粉酶活力單位定義（每小時(shí)分解1克淀粉的酶量稱為1個活力單位），可知1/1000克的淀粉酶的活力單位為：3；3、所以，1克的淀粉酶制劑的活力單位為3×1000=3000。2、用AgNO3對在10毫升含有1.0毫克/毫升蛋白質(zhì)的純酶溶液進(jìn)行全抑制，需用0

4、.342微摩爾AgNO3，求該酶的最低分子量。答：1、已知酶溶液的濃度是1.0毫克/毫升，體積是10毫升，因此該酶溶液中所含的酶蛋白質(zhì)量應(yīng)為：1.0毫克/毫升×10毫升=10毫克；2、而所用的抑制劑AgNO3的物質(zhì)的量為0.342微摩爾，因?yàn)槭乔竺傅淖畹头肿恿浚瑒t可假設(shè)酶只含一個活性中心，抑制劑與酶的作用關(guān)系是等分子數(shù)進(jìn)行，則該酶溶液中所含酶的物質(zhì)的量即為：0.342微摩爾。3、因此該酶的最低分子量為：10毫克/0.342微摩爾=2.92×104。2、影響酶作用的因素1)、酶濃度對酶反應(yīng)速度的影響在

5、有足夠底物和其他條件不變的情況下，反應(yīng)速度與酶濃度成正比。當(dāng)[S]>>[E]時(shí)，V=K3×[E]2)、底物3)、溫度對酶反應(yīng)速度的影響一方面是溫度升高,酶促反應(yīng)速度加快。另一方面,溫度升高,酶的高級結(jié)構(gòu)將發(fā)生變化或變性，導(dǎo)致酶活性降低甚至喪失。因此大多數(shù)酶都有一個最適溫度。在最適溫度條件下,反應(yīng)速度最大。最適溫度不是一個固定的常數(shù)，它隨底物的種類、濃度,溶液的離子強(qiáng)度,pH,反應(yīng)時(shí)間等的影響。例:反應(yīng)時(shí)間短，最適溫度高。反應(yīng)時(shí)間長，最適溫度低。4)、pH對酶反應(yīng)速度的影響酶反應(yīng)的最適pH（optim

6、umpH）酶的最適pH也不是一個固定的常數(shù)，它受到底物的種類、濃度;緩沖液的種類、濃度;酶的純度;反應(yīng)的溫度、時(shí)間等的影響。例:堿性磷酸酶催化磷酸苯酯水解時(shí)[s]為2.5x10-5M，最適pH為8.3[s]為2.5x10-2M，最適pH為10.0pH影響反應(yīng)速度的原因(1)pH影響了酶分子、底物分子和ES復(fù)合物的解離狀態(tài)。(2)過高、過低的pH導(dǎo)致酶蛋白變性。5)、激活劑對酶反應(yīng)速度的影響酶的激活劑1.無機(jī)離子（1）一些金屬離子，如Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+等。（

7、2）陰離子：如Cl-、Br-、I-、CN-等（3）氫離子凡能提高酶活力的物質(zhì)都是酶的激活劑。如：Cl-是唾液淀粉酶的激活劑。2.有機(jī)分子還原劑：抗壞血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽金屬螯合劑：EDTA激活酶原的酶6)、抑制劑對酶活性的影響使酶的活性降低或喪失的現(xiàn)象，稱為酶的抑制作用。能夠引起酶的抑制作用的化合物則稱為抑制劑。抑制劑并非變性劑，抑制劑具有不同程度的選擇性。酶的抑制劑一般具備兩個方面的特點(diǎn)：a.在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與被抑制的底物分子或底物的過渡狀態(tài)相似。b.能夠與酶以非共價(jià)或共價(jià)的方式形成比較穩(wěn)定的復(fù)合

8、體或結(jié)合物。抑制劑類型和特點(diǎn)競爭性抑制劑可逆抑制劑非競爭性抑制劑反競爭性抑制劑非專一性不可逆抑制劑不可逆抑制劑專一性不可逆抑制劑抑制作用的類型：(一)不可逆抑制作用：抑制劑與酶反應(yīng)中心的活性基團(tuán)以共價(jià)形式結(jié)合，引起酶的永久性失活。如有機(jī)磷毒劑二異丙基氟磷酸酯。抑制膽堿酯酶活性，使乙酰膽堿不能被分解成乙酸和膽堿，引起乙酰膽堿的積累，使神經(jīng)處于過渡興奮狀態(tài)，因此此類化合物又稱神經(jīng)毒氣。有機(jī)磷化合物：抑制蛋白酶或酯酶活性敵敵畏敵百蟲薩林有機(jī)砷化合物：與酶的巰基結(jié)合而抑制活性