實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的芽孢染色和鞭毛染色

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1、實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌的鞭毛染色和芽孢染色主講:徐爾尼生命科學(xué)學(xué)院生物技術(shù)系一、目的與要求學(xué)習(xí)細(xì)菌的芽孢染色和鞭毛染色方法。觀察芽孢桿菌形態(tài)特征和鞭毛的形態(tài)特征。鞏固無(wú)菌操作技術(shù)和顯微鏡的油鏡使用。二、基本原理1、鞭毛染色法細(xì)菌的鞭毛很纖細(xì)，其直徑通常為0.01－0.02μm，所以不能用光學(xué)顯微鏡直接觀察到，必須采用特殊的染色方法，才能被觀察。鞭毛染色原理是在染色前先用媒染劑處理，使它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進(jìn)行染色。二、基本原理2、芽孢染色法由于芽孢壁厚、透性低、不易著色，因此用著色力強(qiáng)的染色劑孔雀綠或石炭酸復(fù)紅，在加熱條件下染

2、色，使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽孢內(nèi)，進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫，當(dāng)用對(duì)比度大的復(fù)染劑染色后，芽孢仍保留初染劑顏色，而菌體和芽孢囊被染成復(fù)染劑的顏色，使芽孢和菌體更易于區(qū)分。三、實(shí)驗(yàn)器材1、菌種：普通變形桿菌、枯草芽孢桿菌2、染色劑：硝酸銀鞭毛染色液:(A液、B液）、芽孢染色液:（5%孔雀綠染液、0.5%番紅染液）3、儀器或其他用具：載玻片、生理鹽水、酒精燈、木夾、接種環(huán)、雙層瓶、顯微鏡、擦鏡紙、濾紙等四、操作步驟1、鞭毛染色（硝酸銀染色法）取一滴無(wú)菌水，滴于玻片一端　　　取一環(huán)菌置于無(wú)菌水中，讓菌體

3、利用鞭毛運(yùn)動(dòng)開(kāi)　　然后玻片傾斜，讓菌液緩緩流向玻片的另一端　　室溫自然干燥　　滴加染液A3-5min水洗用染液B沖去殘水　　滴加染液B1-1.5min水洗干燥　　鏡檢結(jié)果：菌體深褐色，鞭毛淡褐色并呈波浪形。操作要點(diǎn)：①菌種的培養(yǎng)時(shí)間為8-10h。②玻片要求光滑、潔凈。③勿用接種環(huán)涂布制片。④制片后要自然干燥，不能放在火焰上干燥。⑤為使鞭毛清晰可見(jiàn)，水洗時(shí)盡量把載玻片沖干凈。四、操作步驟2、芽孢染色涂片　　干燥固定　　滴加孔雀綠染液夾住玻片，微火加熱至蒸汽冒出，維持5min水洗　　番紅復(fù)染6min水洗　　干燥　　鏡檢結(jié)果：芽孢綠色，

4、營(yíng)養(yǎng)體紅色。操作要點(diǎn)：加熱過(guò)程中，要及時(shí)補(bǔ)充染液，切勿讓涂片干涸。在冒蒸汽的條件下，維持足夠的時(shí)間，否則染液不易進(jìn)入芽孢內(nèi)。待玻片冷卻后，用緩流自來(lái)水沖洗，以免細(xì)菌被水沖掉。盡可能地把孔雀綠染液沖洗干凈，以免影響番紅的復(fù)染。五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及處理結(jié)果1、根據(jù)油鏡觀察結(jié)果，繪出枯草芽孢桿菌的形態(tài)特征（注意芽孢的形狀及著生位置）。2、繪出普通變形桿菌的鞭毛形態(tài)特征。六、思考與討論1、用鞭毛染色法準(zhǔn)確鑒定一株細(xì)菌是否具有鞭毛，要注意哪些環(huán)節(jié)？2、若涂片中觀察到的只是大量游離芽孢，很少看到芽孢囊及營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，你認(rèn)為這是什么原因？3、說(shuō)明芽孢染色

5、法的原理，用簡(jiǎn)單染色法能否觀察到細(xì)菌的芽孢？下次實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：放線菌的形態(tài)觀察、酵母菌的形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的鑒別