實驗 二 細菌的芽孢染色, 鞭毛

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1、實驗二細菌的芽孢染色,鞭毛染色,莢膜染色日期10月20號星期三90節(jié)同組者一實驗目的1學習細菌的芽孢染色法2學習細菌的鞭毛染色法3學習細菌的莢膜染色法二實驗原理1芽孢染色的原理:細菌的芽孢具有厚而致密的壁。透性低，不易著色，若用一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色（芽孢呈無色透明狀）。芽孢染色法就是根據(jù)芽孢既難以染色但一旦染上色后又難以脫色這一特點而設計的。所有的芽孢染色法都基于同一個原則；除了用著色力強的染料外，還需要加熱，以促進芽孢著色。當染芽孢時，菌體也會著色，然后水洗，芽孢染上的顏色難以滲出，而菌體會脫色。然后用對比度強的染料對菌體復染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不

2、同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，便于觀察。2鞭毛染色的原理:細菌的鞭毛極細，直徑一般為0.01～0.02μm，只有用電子顯微鏡才能觀察到。但是，如采用特殊的染色法，則在普通光學顯微鏡下也能看到它。在染色前先用媒染劑處理、讓它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進行染色。3莢膜染色的原理:莢膜是細菌分泌到菌體周圍的一層黏液狀物質(zhì),通常是多糖和多肽類物質(zhì).由于莢膜與染料間的親和力弱，不易著色，通常采用負染色法染莢膜，即設法使菌體和背景著色而莢膜不著色，從而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。由于莢膜的含水量在90%以上，故染色時一般不加熱固定。以免莢膜皺縮變形。三實驗器材1

3、菌種：培養(yǎng)24h的枯草桿菌（Bacillcussubtilis）、培養(yǎng)12-16h的變形桿菌斜面,培養(yǎng)3d的固氮菌。2染色液和試劑：5％孔雀綠水溶液、番紅水溶液,鞭毛染色液A液與B液，蒸餾水，香柏油，顯微鏡擦拭液,繪圖墨水或黑色素溶液．３器材：酒精燈、接種環(huán)、鑷子、載玻片、擦鏡紙、吸水紙、記號筆、試管夾、顯微鏡等。四實驗方法（一）芽孢染色：1涂片：按常規(guī)方法將待檢細菌制成一薄的涂片。2晾干固定；待涂片晾干后在酒精燈火焰上通過3次。3染色：A加染色液。加5％孔雀綠水溶液于涂片處（染料以鋪滿涂片為度），然后將涂片用試管夾夾住，用酒精燈火焰加熱至染液冒蒸汽對開始計算時問，

4、約維持４～５min。加熱過程中要隨時交替添加染色液和蒸餾水，切勿讓標本干涸（加熱時溫度不能太高）。B水洗：待玻片冷卻后，用水輕輕地沖洗，直至流出的水中無染色液為止。C復染：用番紅液染色２－３min。D水洗、晾干或吸干。４　鏡撿：先低倍，再高倍，最后在油鏡下觀察芽孢和菌體的形態(tài)。結(jié)果：芽孢呈綠色，菌體為紅色。（二）　鞭毛染色?。敝破何∩倭空麴s水滴在潔凈玻片的一端，無菌操作在斜面上取菌少許，在蒸餾水中輕沾，立即將玻片傾斜，使菌液緩慢地流向另一端。用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放空氣中自然干燥。２　染色：1）滴加A液，染4～6min。2）用蒸餾水充分洗凈A液。3）用B液

5、沖去殘水，再加B液于玻片上，在酒精燈火焰上加熱至冒氣，約維持0.5～lmin(加熱時應隨時補充蒸發(fā)掉的染料，不可使玻片出現(xiàn)干涸)。4)用蒸餾水洗，自然干燥。３鏡檢：先低倍，再高倍，最后用油鏡檢查。結(jié)果：菌體呈深褐色，鞭毛呈淺褐色。（三）　莢膜染色：1制菌液：加1滴墨水于潔凈的載玻片上，挑少量菌體與其充分混合均勻。2推片：取一清潔載玻片一端接觸混合液，以30°角進行推片。3晾干：在空氣中自然晾干。４鏡檢：先用低倍鏡、再用高倍鏡、油鏡觀察。５結(jié)果：背景黑色，菌體因折光不同顯黑色或白色，在其周圍呈現(xiàn)一明亮的透明圈即為莢膜。五實驗現(xiàn)象一芽孢染色三莢膜染色六實驗結(jié)果及思考題1

6、用簡單染色法能否觀察到細菌的芽孢?說明原因.答：不能。細菌的芽孢具有厚而致密的壁。透性低，不易著色，若用一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色（芽孢呈無色透明狀）。2用鞭毛染色法準確鑒定一株菌是否有鞭毛,要注意哪些環(huán)節(jié)?答：1、實驗中所用的菌株要新鮮，時間長的菌株鞭毛會脫落2、新鮮的染色液3、制片時不能加熱固定4、菌體活化的情況，即要連續(xù)移種多次3莢膜染色為什么要用襯托染色法?答：莢膜是包圍在細菌細胞外面的一層粘液性物質(zhì)，其主要成分是多糖類，由于莢膜與染料的親和力弱，不易著色，而且可溶于水，易在用水沖洗時被除去，所以通常用襯托染色法染色法染色，使菌體和背景著色，而莢膜

7、不著色，在菌體周圍形成一透明膜。