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1、實用標準文案實驗四觀察鞭毛菌的運動、細菌鞭毛染色13生物基地201300140059劉洋2014-10-28同組者：呂贊劉沛余馬華崢一、實驗器材1.菌種枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）1~2d牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）1~2d牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物2.溶液和試劑0.01%美藍水溶液、硝酸銀染液AB液3.儀器和其他用品酒精燈，載玻片，顯微鏡，雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯），擦鏡紙，接種環(huán)，小試管，燒杯，試管架，載玻片夾，滴管，無菌水等二、實驗目的1.學習并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形態(tài)特
2、征。2.鞏固顯微鏡操作技術(shù)及無菌操作技術(shù)。三、實驗原理1.菌種壓滴法觀察活菌運動鞭毛的功能相當于船的螺漿，在水中可以高速旋轉(zhuǎn)從而推動菌體前行，鞭毛馬達還可以轉(zhuǎn)向（從反時針旋轉(zhuǎn)變?yōu)轫槙r針旋轉(zhuǎn)）從而使菌體發(fā)生翻滾進而改變細菌的運動方向，事實上細菌在游動時也并不是單純地一直朝前游，而是伴隨著不時的隨機翻滾轉(zhuǎn)向，但從表觀上看仍表現(xiàn)為細菌的前行。細菌未染色時無色透明，在顯微鏡下主要靠細菌的折光率與周圍環(huán)境的不同來進行觀察。鞭毛的細菌運動活潑，且不同時向一個方向運動，而無鞭毛的細菌則呈不規(guī)則布朗運動。這樣便可以在光學顯微鏡下觀察到細菌的運動。2.鞭毛染色鞭毛是細菌的纖細絲
3、狀運動“器官”。鞭毛的有無、數(shù)量及著生方式也是細菌分類的重要指標。鞭毛直徑一般為10~30mn，只有用電鏡才能直接觀察到。若要用普通光學顯微鏡觀察，必須使用鞭毛染色法。首先用媒染劑（如單寧酸或明礬鉀）處理，使媒染劑附著在鞭毛上使其加粗，然后用堿性復紅（Gray氏染色法）、堿性復品紅（Leifson氏染色法）、硝酸銀（West氏染色法）或結(jié)晶紫（Difeo氏染色法）進行染色。四、實驗步驟壓滴法觀察活菌活動1.涂片取一塊載玻片，在中央滴一滴蒸餾水，用接種環(huán)無菌操作從枯草芽孢桿菌（銅綠假單孢菌)斜面上挑數(shù)環(huán)菌置于載玻片液滴上，小液滴呈混濁狀即可。2.染色（可省略）取
4、一滴0.01%美藍溶液滴在小液滴上。3.蓋片滴完染色劑后，用鑷子夾一潔凈的蓋玻片，先使其一邊接觸菌液，然后慢慢地放下蓋玻片，防止產(chǎn)生氣泡。（蓋片要迅速）文檔實用標準文案2.鏡檢蓋片完成后迅速拿到顯微鏡下觀察，將光線適當調(diào)暗，先用低倍鏡找到觀察部位，再用高倍鏡觀察。要區(qū)分細菌鞭毛運動和布朗運動，后者只是在原處左右擺動，細菌細胞間有明顯位移者，才能判定為有運動性。（若觀察不到，可用油鏡）鞭毛染色（硝酸銀染色法）1.載玻片準備將載玻片置于含洗衣粉或洗滌劑的水中煮沸20min，然后用清水充分洗凈，再置于95%乙醇中浸泡，使用時取出在火焰上燒去乙醇及可能殘留的油跡2.菌
5、液制備無菌操作用接種環(huán)由普通變形菌14~18h牛肉膏蛋白胨半固體新鮮培養(yǎng)物平板上挑取數(shù)環(huán)菌落邊緣菌體，懸浮于1~2mL無菌水中制成輕度渾濁的菌懸液，不能劇烈震蕩。3.制片取一滴菌懸液滴到潔凈載玻片一端，傾斜玻片，使菌懸液緩慢流向另一端，用吸水紙吸去多余菌懸液，自然干燥。4.染色滴加硝酸銀染液A液覆蓋菌面3~5min后用蒸餾水充分洗去A液。用硝酸銀染液B液洗去殘留水分后，再滴加B液覆蓋菌面數(shù)秒至1min，其間可用微火加熱，當菌面出現(xiàn)明顯褐色時，立即用蒸餾水沖洗，自然干燥。5.鏡檢用油鏡鏡檢檢查。一、注意事項1.選用活躍生長期菌種進行鞭毛染色，老齡菌鞭毛易脫落。2
6、.載玻片必須清潔、光滑、無油跡，否則菌液不能散開，造成菌體堆積，鞭毛相互糾纏而難以看清，而且染色后背景臟亂。3.制片過程中條件要溫和，不能劇烈震蕩、涂抹菌液，也不能采用加熱法進行固定，否則鞭毛易脫落。4.按要求配制合格的染液。5.硝酸銀染液B液染色時間的掌握和Leifson氏鞭毛染液最佳染色時間的確定是本實驗能否成功的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。文檔實用標準文案一、實驗結(jié)果及分析被殺死的銅綠假單胞菌運動的枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌文檔實用標準文案觀察到周生鞭毛的枯草芽孢桿菌周生鞭毛文檔實用標準文案觀察到端生鞭毛的銅綠假單胞菌端生鞭毛一、結(jié)果分析1.銅綠假單胞菌一開始被殺死的原因
7、可能是染色時間過長。2.銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌在壓滴法觀察中向各個方向運動，可以推斷均有鞭毛。3.枯草芽孢桿菌長桿狀，菌體長短不一但寬度一致，為周生鞭毛，鞭毛數(shù)量多。4.綠假單胞菌兩端鈍圓短桿狀，為端生鞭毛，鞭毛數(shù)量少。二、思考題1.除鞭毛染色法外，還有什么辦法能觀察到鞭毛？可直接在電子顯微鏡下觀察，電子顯微鏡放大倍數(shù)高，可以觀察到鞭毛。2.你對你所做的鞭毛染色結(jié)果滿意嗎？如果不滿意，有哪些方面需要改進？如果滿意，你的成功經(jīng)驗是什么？不是很滿意，沖洗A液時有時水流過大使得鞭毛脫落，染色時間控制還不得當。3.如果你發(fā)現(xiàn)鞭毛已與菌體脫離，請解釋原因。（1）可能
8、是菌齡過大，自然脫落；（2）操作時玻片
