資源描述：
《實驗四觀察鞭毛菌地運(yùn)動、細(xì)菌鞭毛染色》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、實用標(biāo)準(zhǔn)文案實驗四觀察鞭毛菌的運(yùn)動、細(xì)菌鞭毛染色13生物基地201300140059劉洋2014-10-28同組者：呂贊劉沛余馬華崢一、實驗器材1.菌種枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）1~2d牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）1~2d牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物2.溶液和試劑0.01%美藍(lán)水溶液、硝酸銀染液AB液3.儀器和其他用品酒精燈，載玻片，顯微鏡，雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯），擦鏡紙，接種環(huán)，小試管，燒杯，試管架，載玻片夾，滴管，無菌水等二、實驗?zāi)康?.學(xué)習(xí)并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形態(tài)特
2、征。2.鞏固顯微鏡操作技術(shù)及無菌操作技術(shù)。三、實驗原理1.菌種壓滴法觀察活菌運(yùn)動鞭毛的功能相當(dāng)于船的螺漿，在水中可以高速旋轉(zhuǎn)從而推動菌體前行，鞭毛馬達(dá)還可以轉(zhuǎn)向（從反時針旋轉(zhuǎn)變?yōu)轫槙r針旋轉(zhuǎn)）從而使菌體發(fā)生翻滾進(jìn)而改變細(xì)菌的運(yùn)動方向，事實上細(xì)菌在游動時也并不是單純地一直朝前游，而是伴隨著不時的隨機(jī)翻滾轉(zhuǎn)向，但從表觀上看仍表現(xiàn)為細(xì)菌的前行。細(xì)菌未染色時無色透明，在顯微鏡下主要靠細(xì)菌的折光率與周圍環(huán)境的不同來進(jìn)行觀察。鞭毛的細(xì)菌運(yùn)動活潑，且不同時向一個方向運(yùn)動，而無鞭毛的細(xì)菌則呈不規(guī)則布朗運(yùn)動。這樣便可以在光學(xué)顯微鏡下觀察到細(xì)菌的運(yùn)動。2.鞭毛染色鞭毛是細(xì)菌的纖細(xì)絲
3、狀運(yùn)動“器官”。鞭毛的有無、數(shù)量及著生方式也是細(xì)菌分類的重要指標(biāo)。鞭毛直徑一般為10~30mn，只有用電鏡才能直接觀察到。若要用普通光學(xué)顯微鏡觀察，必須使用鞭毛染色法。首先用媒染劑（如單寧酸或明礬鉀）處理，使媒染劑附著在鞭毛上使其加粗，然后用堿性復(fù)紅（Gray氏染色法）、堿性復(fù)品紅（Leifson氏染色法）、硝酸銀（West氏染色法）或結(jié)晶紫（Difeo氏染色法）進(jìn)行染色。四、實驗步驟壓滴法觀察活菌活動1.涂片取一塊載玻片，在中央滴一滴蒸餾水，用接種環(huán)無菌操作從枯草芽孢桿菌（銅綠假單孢菌)斜面上挑數(shù)環(huán)菌置于載玻片液滴上，小液滴呈混濁狀即可。2.染色（可省略）取
4、一滴0.01%美藍(lán)溶液滴在小液滴上。3.蓋片滴完染色劑后，用鑷子夾一潔凈的蓋玻片，先使其一邊接觸菌液，然后慢慢地放下蓋玻片，防止產(chǎn)生氣泡。（蓋片要迅速）文檔實用標(biāo)準(zhǔn)文案2.鏡檢蓋片完成后迅速拿到顯微鏡下觀察，將光線適當(dāng)調(diào)暗，先用低倍鏡找到觀察部位，再用高倍鏡觀察。要區(qū)分細(xì)菌鞭毛運(yùn)動和布朗運(yùn)動，后者只是在原處左右擺動，細(xì)菌細(xì)胞間有明顯位移者，才能判定為有運(yùn)動性。（若觀察不到，可用油鏡）鞭毛染色（硝酸銀染色法）1.載玻片準(zhǔn)備將載玻片置于含洗衣粉或洗滌劑的水中煮沸20min，然后用清水充分洗凈，再置于95%乙醇中浸泡，使用時取出在火焰上燒去乙醇及可能殘留的油跡2.菌
5、液制備無菌操作用接種環(huán)由普通變形菌14~18h牛肉膏蛋白胨半固體新鮮培養(yǎng)物平板上挑取數(shù)環(huán)菌落邊緣菌體，懸浮于1~2mL無菌水中制成輕度渾濁的菌懸液，不能劇烈震蕩。3.制片取一滴菌懸液滴到潔凈載玻片一端，傾斜玻片，使菌懸液緩慢流向另一端，用吸水紙吸去多余菌懸液，自然干燥。4.染色滴加硝酸銀染液A液覆蓋菌面3~5min后用蒸餾水充分洗去A液。用硝酸銀染液B液洗去殘留水分后，再滴加B液覆蓋菌面數(shù)秒至1min，其間可用微火加熱，當(dāng)菌面出現(xiàn)明顯褐色時，立即用蒸餾水沖洗，自然干燥。5.鏡檢用油鏡鏡檢檢查。一、注意事項1.選用活躍生長期菌種進(jìn)行鞭毛染色，老齡菌鞭毛易脫落。2
6、.載玻片必須清潔、光滑、無油跡，否則菌液不能散開，造成菌體堆積，鞭毛相互糾纏而難以看清，而且染色后背景臟亂。3.制片過程中條件要溫和，不能劇烈震蕩、涂抹菌液，也不能采用加熱法進(jìn)行固定，否則鞭毛易脫落。4.按要求配制合格的染液。5.硝酸銀染液B液染色時間的掌握和Leifson氏鞭毛染液最佳染色時間的確定是本實驗?zāi)芊癯晒Φ年P(guān)鍵環(huán)節(jié)。文檔實用標(biāo)準(zhǔn)文案一、實驗結(jié)果及分析被殺死的銅綠假單胞菌運(yùn)動的枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌文檔實用標(biāo)準(zhǔn)文案觀察到周生鞭毛的枯草芽孢桿菌周生鞭毛文檔實用標(biāo)準(zhǔn)文案觀察到端生鞭毛的銅綠假單胞菌端生鞭毛一、結(jié)果分析1.銅綠假單胞菌一開始被殺死的原因
7、可能是染色時間過長。2.銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌在壓滴法觀察中向各個方向運(yùn)動，可以推斷均有鞭毛。3.枯草芽孢桿菌長桿狀，菌體長短不一但寬度一致，為周生鞭毛，鞭毛數(shù)量多。4.綠假單胞菌兩端鈍圓短桿狀，為端生鞭毛，鞭毛數(shù)量少。二、思考題1.除鞭毛染色法外，還有什么辦法能觀察到鞭毛？可直接在電子顯微鏡下觀察，電子顯微鏡放大倍數(shù)高，可以觀察到鞭毛。2.你對你所做的鞭毛染色結(jié)果滿意嗎？如果不滿意，有哪些方面需要改進(jìn)？如果滿意，你的成功經(jīng)驗是什么？不是很滿意，沖洗A液時有時水流過大使得鞭毛脫落，染色時間控制還不得當(dāng)。3.如果你發(fā)現(xiàn)鞭毛已與菌體脫離，請解釋原因。（1）可能
8、是菌齡過大，自然脫落；（2）操作時玻片
