細(xì)菌鞭毛染色及運(yùn)動性觀察

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1、細(xì)菌鞭毛染色及運(yùn)動性觀察郭森20090014002909級生命基地周二下午摘要：本實(shí)驗(yàn)以蘇云金芽孢桿菌和假單胞菌為實(shí)驗(yàn)菌種，分別將其制備成菌液并制片。而后，使用鞭毛染色法（用硝酸銀染液A液和B液進(jìn)行染色）對其染色，之后用光學(xué)顯微鏡的油鏡觀察細(xì)菌鞭毛的形態(tài)；使用壓滴法并用美蘭染色后，之后用光學(xué)顯微鏡的高倍鏡觀察細(xì)菌的活體運(yùn)動。實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們并沒有觀察到鞭毛結(jié)構(gòu)，但在實(shí)驗(yàn)中已大致掌握相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作。關(guān)鍵詞：蘇云金芽孢桿菌；假單胞菌；鞭毛染色法；壓滴法前言：鞭毛是細(xì)胞的纖細(xì)絲狀運(yùn)動“器官”。鞭毛的有無、數(shù)量及著生方式也是細(xì)菌分類的重

2、要指標(biāo)。鞭毛直徑一般為10~30nm，只有用電鏡才能觀察到。若要用普通光學(xué)顯微鏡觀察，必須使用鞭毛染色法。因此在本實(shí)驗(yàn)中，要觀察細(xì)菌鞭毛形態(tài)，就要使用鞭毛染色法。本實(shí)驗(yàn)使用染液的是硝酸銀染液A液和B液；而觀察細(xì)菌的運(yùn)動性時(shí)要使用壓滴法就要用美蘭染色。本實(shí)驗(yàn)選用的的菌種是具周生鞭毛的蘇云金芽孢桿菌和具端生鞭毛的的假單胞菌，均可使用兩種方法進(jìn)行觀察。本實(shí)驗(yàn)報(bào)告先介紹了本次實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)材料與方法，然后是對實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與分析進(jìn)行描述，最后是總結(jié)性的小結(jié)部分。1材料與方法1、1材料1、1、1菌種蘇云金芽孢桿菌，假單胞菌。1、1、2溶液和

3、試劑硝酸銀鞭毛染液（A、B液），0.01%美蘭水溶液。1、1、3儀器和其他用品普通光學(xué)顯微鏡，擦鏡紙，酒精燈，載玻片，雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯），接種環(huán)，試管架，鑷子，吸水紙，滴管等。1、2步驟和方法1、2、1菌液制備無菌操作用接種環(huán)由普通變形菌14~18h牛肉膏蛋白胨半固體新鮮培養(yǎng)物平板上挑取數(shù)環(huán)菌落邊緣菌體，懸浮于1~2ml無菌水中制成輕度渾濁的菌懸液，不能劇烈震蕩。1、2、2鞭毛染色1、2、2、1制片取一滴菌懸液滴到潔凈載玻片一端，傾斜玻片，使菌懸液緩慢流向另一端，用吸水紙吸去多余菌懸液，自然干燥。1、2、2、2染

4、色滴加硝酸銀染液A液覆蓋菌面3~5min后用蒸餾水充分洗去A液。用硝酸銀染液B液洗去殘留水分后，再滴加B液覆蓋菌面數(shù)秒至1min，其間可用微火加熱，當(dāng)菌面出現(xiàn)明顯褐色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗，自然干燥。1、2、2、3鏡檢使用光學(xué)顯微鏡中的油鏡鏡檢1、2、3壓滴法1、2、3、1制片取一滴菌懸液滴到潔凈載玻片中央，取一潔凈蓋玻片讓其一端緊靠液滴的一端緩慢放下，避免產(chǎn)生氣泡。1、2、3、2染色取一滴美蘭水溶液，滴到蓋玻片一端，傾斜玻片，并用吸水紙?jiān)谏w玻片另一端吸引美蘭水溶液使之對菌體染色充分，最后用吸水紙吸去多余水分。1、2、3、3

5、鏡檢使用光學(xué)顯微鏡中的高倍鏡進(jìn)行鏡檢1結(jié)果與分析2、1實(shí)驗(yàn)結(jié)果在對我制作的兩個(gè)鞭毛染色的玻片進(jìn)行觀察時(shí)，我并沒有發(fā)現(xiàn)鞭毛結(jié)構(gòu)；而使用壓滴法進(jìn)行觀察時(shí)，也沒有觀察到假單胞菌的運(yùn)動。（見圖1~圖3）圖1鞭毛染色后蘇云金芽孢桿菌顯微觀察圖（10x100）圖2鞭毛染色后銅綠假單胞桿菌顯微觀察圖（10x100）圖3壓滴法觀察銅綠假單胞桿菌顯微觀察圖（10x40）2、2結(jié)果分析根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，首先，蘇云金芽孢桿菌結(jié)構(gòu)呈細(xì)長狀，多為鏈型，假單胞菌為橢圓狀，多單個(gè)分布。然后，鞭毛染色失敗的原因主要有以下幾點(diǎn)：一、在配制菌液時(shí)，為了使其混合均

6、勻，震蕩用力過大，沖洗時(shí)水流也比較大，導(dǎo)致鞭毛脫落；二、對于硝酸銀染液B液，我并沒有很好的控制時(shí)間，基本上都超時(shí)了。對于壓滴法，可能是因?yàn)槊捞m使用過多加上沒有在第一時(shí)間進(jìn)行觀察，所以導(dǎo)致假單胞菌死亡，導(dǎo)致制片失敗。因此，本次實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象表明，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)當(dāng)多注意操作的規(guī)范性，注意操作細(xì)節(jié)。1小結(jié)本次實(shí)驗(yàn)要求我們使用鞭毛染色法和壓滴法對細(xì)菌的鞭毛形態(tài)和其運(yùn)動性進(jìn)行觀察。因此在實(shí)驗(yàn)中我們首先接觸到了鞭毛染色法和壓滴法，因此經(jīng)過實(shí)驗(yàn)后對其大致操作基本上已經(jīng)了解。但是在實(shí)驗(yàn)中還有很多需要注意的地方，并且我對實(shí)驗(yàn)結(jié)果不滿意，這其中也有很多

7、的原因。首先，本實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)：（1）選用活躍生長期菌種進(jìn)行鞭毛染色，老齡菌鞭毛易脫落。（2）載玻片必須清潔、光滑、無油跡，否則菌液不能散開，造成菌體堆積，鞭毛相互糾纏而難以看清，而且染色后背景臟亂。（3）制片過程中條件要溫和，不能劇烈震蕩、涂抹菌液，也不能采用加熱法進(jìn)行固定，否則鞭毛易脫落。（4）按要求配制合格的染液。（5）硝酸銀染液B液染色時(shí)間的掌握是本實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癯晒Φ年P(guān)鍵環(huán)節(jié)。然后，在本實(shí)驗(yàn)中，我做的染色結(jié)果并不讓我滿意，因?yàn)榫w中鞭毛大都已脫落，而且染色后觀察菌體并不很清楚。在實(shí)驗(yàn)中，我有很多不足，首先是我的載玻片

8、上油跡比較多，而我多次進(jìn)行清潔后效果可能仍然不佳，這可能是觀察不清楚的原因；然后，我在配制菌液時(shí)用力幅度可能過大，導(dǎo)致菌液震蕩比較厲害，因此可能會導(dǎo)致鞭毛的脫落；最后，我在進(jìn)行硝酸銀B液染色時(shí)同時(shí)對上一個(gè)玻片進(jìn)行觀察，在時(shí)間上染色時(shí)間應(yīng)該過長，這可能是導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)不大成功的關(guān)鍵原因。因此，在本實(shí)驗(yàn)中以上方面