實(shí)驗(yàn)四 鞭毛染色法及活細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性觀察

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1、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告生命科學(xué)學(xué)院09級(jí)1班安明玉（200900140001）（同組者：陳汶燦、陳肖然、程彬、高琳璐、秦瑤）實(shí)驗(yàn)四鞭毛染色法及活細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的觀察一、目的要求1?.學(xué)習(xí)并初步掌握鞭毛染色法，觀察細(xì)菌鞭毛的形態(tài)特征。2?.學(xué)習(xí)用壓滴法和懸滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性。二、基本原理鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官，鞭毛的有無(wú)、數(shù)量及著生方式也是細(xì)菌分類的重要指標(biāo)。鞭毛直徑一般為10～30nm，只有用電鏡才能直接觀察到。若要用普通光學(xué)顯微鏡觀察，必須使用鞭毛染色法。首先用媒染劑（如單寧酸或明礬鉀）處理，使媒染劑附著在鞭毛上使其加粗，然后用堿性復(fù)紅（Gray式染色法）、堿性復(fù)品紅（Leifson氏

2、染色法）、硝酸銀（West氏染色法）或結(jié)晶紫（Difco氏染色法）進(jìn)行染色。本實(shí)驗(yàn)介紹硝酸銀染色法和改良的Lifson?氏染色法，前一種方法更容易掌握．但染色劑配制后保存期較短。在顯微鏡下觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性，也可以初步判斷細(xì)菌是否有鞭毛．細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的觀察可用壓滴法和懸滴法，本實(shí)驗(yàn)主要介紹前者。觀察時(shí)，要適當(dāng)減弱光強(qiáng)度以增加反差，若光線太強(qiáng)，細(xì)菌和周圍的液體難以區(qū)分。三、器材1?.菌種枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物，銅綠假單胞菌（P.Aeruginosa）牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)物。2?.染色劑番紅水溶液，結(jié)晶紫水溶液，硝酸銀鞭毛染色液(

3、A液，B液)，Leifson氏鞭毛染色液，美藍(lán)水溶液，香柏油，蒸餾水，95%乙醇溶液。3?.儀器或其他用具載玻片，蓋玻片，無(wú)菌水，接種環(huán)，擦鏡紙，顯微鏡等．四、操作步驟1.鞭毛染色(1)載玻片準(zhǔn)備將載玻片用清水充分洗凈，再置于95%乙醇中浸泡，5min后取出載玻片自然干燥。(2)制片在載玻片的一端滴一滴蒸餾水，用接種環(huán)蘸取少許備用的菌落（最好從菌落的邊緣取菌苔，注意不要挑上培養(yǎng)基），在載玻片的水滴中輕沾幾下，將載玻片稍傾斜，使菌液隨水滴緩慢流到另一端，然后平放在空氣中自然干燥。(3)染色涂片干燥后滴加硝酸銀鞭毛染色液A液染3～5分鐘，用蒸餾水沖洗，用B液覆蓋0.5～1min（注

4、意：一定要充分洗凈A液后再加B液，否則背景很臟），用蒸餾水沖洗，自然干燥。(4)鏡檢鏡檢時(shí)，如未見(jiàn)鞭毛，應(yīng)在整個(gè)涂片上多找?guī)讉€(gè)視野，有時(shí)只在部分涂片上染出鞭毛。菌體為深褐色，鞭毛為褐色。2．運(yùn)動(dòng)性觀察——壓滴法(1)制片在潔凈載玻片上加一滴無(wú)菌水，用接種環(huán)蘸取少許備用的菌落，在載玻片的水滴中輕沾幾下，滴加一滴稀釋美藍(lán)水溶液與其混合均勻．(2)加蓋玻片用鑷子取一沽凈蓋玻片，使其一邊與菌液邊緣接觸，然后將蓋玻片緩慢放下蓋在菌液上。(3)鏡檢先用低倍鏡找到標(biāo)本，再用高倍鏡觀察。也可用油鏡觀察，觀察時(shí)，要用略暗光線，五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖1枯草芽孢桿菌鞭毛染色圖2銅綠假單胞菌運(yùn)動(dòng)性的觀察圖3鞭

5、毛染色范例（資料）六、思考題1.除鞭毛染色法外，還有什么方法能觀察到鞭毛？答：還可以使用電子顯微鏡觀察。2.如果你發(fā)現(xiàn)鞭毛與菌體脫離，請(qǐng)解釋原因。答：鞭毛與菌體脫離可能是由于水洗時(shí)水流的沖擊或蓋玻片的擠壓造成。七、實(shí)驗(yàn)分析1.細(xì)菌鞭毛染色要求非常小心細(xì)致，染色成功的關(guān)鍵主要決定于：(a)菌種活化的情況，即要連續(xù)移種幾次；(b)菌齡要合適，一般在幼齡時(shí)鞭毛情況最好，易于染色；(c)新鮮的染色液；(d)載玻片要求干凈無(wú)油污。2.經(jīng)鞭毛染色法染色的有鞭毛細(xì)菌菌體呈深褐色，鞭毛淺褐色且通常呈波浪形。3.有鞭毛細(xì)菌可作直線、波浪式或翻滾運(yùn)動(dòng)，兩個(gè)細(xì)菌之間出現(xiàn)明顯的位移而與布朗運(yùn)動(dòng)或隨水流

6、動(dòng)相區(qū)別．