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《07豆豉纖溶酶高產菌株的篩選研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第37卷第1期工業(yè)微生物Vol.37No.12007年2月IndustrialMicrobiologyFeb.2007豆豉纖溶酶高產菌株的篩選研究3張自強,張云開,陳桂光,梁智群(廣西大學生命科學與技術學院食品發(fā)酵工程研究所,南寧530004)摘要以中國豆豉為材料,取6個不同來源的樣品經富集培養(yǎng)后,用自制血纖維蛋白平板進行初篩;利用LB纖維蛋白平板復篩與血瓊脂平板進行體外溶血試驗相結合的方法,篩選出安全性良好并有一定纖溶活性的菌株。再對復篩得到的菌株進行搖瓶培養(yǎng),用纖維蛋白平板法測定并比較不同菌
2、株發(fā)酵液的纖溶活性。結果成功地篩選出5株纖溶活性高和通過溶血性實驗的芽孢桿菌菌株,其中菌株DC2C4粗酶液的酶活稍高,達到280IU/mL。采用16S223SrDNA序列分析法及傳統的生理生化特征鑒定法對該菌株進行鑒定,確定菌株DC2C4為蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)。本實驗為開發(fā)新型溶栓藥物及保健食品提供了實驗參考依據。關鍵詞:纖溶酶;豆豉;篩選;纖維蛋白平板;16S223SrDNA1987年日本學者須見洋行(Sumi)首次對納豆121℃,15min滅菌備用。將冷藏的粗制血纖維
3、蛋白[1]及其提取物作了系統研究,發(fā)現納豆激酶(Nat2添加1倍體積蒸餾水打碎,置于微波爐內用中等火tokinase)有明顯溶栓作用,是一種非常有前途的溶力加熱使其凝結,再用食品加工機打碎,121℃,[2]血栓、抗血栓的新型藥物。中國傳統食品豆豉與15min滅菌備用。在超凈臺中將纖維蛋白懸浮液加納豆類似,在發(fā)酵過程中亦可能產生具纖溶活性的入營養(yǎng)培養(yǎng)基中,制得富集培養(yǎng)基。[3]激酶。近年的研究發(fā)現豆豉中具有多種生物活初篩培養(yǎng)基(%):自制血纖維蛋白2,蛋白胨性物質,其中豆豉激酶被證明除了具有前兩代
4、溶栓1,NaCl0.5,瓊脂2,調pH7.2。[8]藥物的優(yōu)點之外,還具有無毒副作用、不引起內出復篩培養(yǎng)基:LB培養(yǎng)基,pH7.0～7.2,滅菌血、半衰期長等特點。因此,豆豉很有希望開發(fā)成為備用。將100mLLB培養(yǎng)基融化后置于45℃水浴新的保健(功能)食品。本研究致力于從幾種不同產鍋中(A);在25mL磷酸緩沖液(PBS,0.01mol/L,地的市售豆豉中篩選高纖溶酶活力的出發(fā)菌株,為pH7.8,以下均同)中溶解55mg血纖維蛋白原后置開發(fā)新型溶栓藥物及保健食品提供實驗參考依據。于45℃水浴(
5、B);取5mLPBS溶解50U凝血酶置于45℃水浴(C)。將C加入A中,再將B加入,迅速混1材料勻后鋪平板,靜置冷卻。[4]材料與試劑:6種不同產地的豆豉購于市場(豆血瓊脂平板:調pH8.0,滅菌后于45℃時加##豉樣品1～6分別產自四川、云南、山東、廣西、浙入新鮮豬血(5%～10%),混合均勻倒平板。[5]江和福建)。大豆胰蛋白胨來自北京雙旋微生物培斜面培養(yǎng)基:調pH至7.2。[5]養(yǎng)基制品廠。酵母抽提物為Sigma公司產品。凍干種子培養(yǎng)基:調pH至7.2。[5]人纖維蛋白原購自上海萊士血制品
6、有限公司。尿激發(fā)酵培養(yǎng)基:調pH至7.2。酶購自哈爾濱三聯藥業(yè)有限公司。凝血酶購自廣西2方法華興生物制品有限公司。Taq酶為TaKaRa(大連)公司產品。其他試劑均為國產分析純。2.1富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)基(%):蛋白胨1,NaCl0.5,pH7.2,(1)血纖維蛋白的提取。作者簡介:張自強(1979～),男,碩士研究生。3通訊聯系人,電話:0771-3270733,E-mail:zqliang@gxu.edu.cn—67—第1期工業(yè)微生物第37卷取1.5L新鮮豬血,4℃冷藏1～3h產生凝血較,查出
7、樣品酶活。塊。將凝血塊放入食品加工機,加入1倍體積的去尿激酶標準曲線的繪制:取適量尿激酶標準品,離子水,打碎后8000r/min、10min離心,去上清液,用PBS制成2IU/μL,4IU/μL,6IU/μL,8IU/μL,用去離子水洗滌沉淀,反復打碎、離心、取沉淀、洗10IU/μL標準液。分別取10μL標準酶液,加入纖滌,直至沉淀無紅色為止,即得到粗制的血纖維蛋維蛋白平板上的孔中。37℃培養(yǎng)18h后測量透明圈白。置于4℃冷藏。的最大直徑以及與之垂直的直徑,計算直徑乘積;以(2)接種。直徑積為橫
8、坐標,酶活為縱坐標,在對數坐標紙上制##從市售的豆豉樣品1～6中分別取幾粒放入作標準曲線。無菌研缽中,加3mL無菌生理鹽水,磨碎后靜置,用2.6菌種鑒定微量移液器取上清液1mL,加到富集培養(yǎng)基中,2.6.1基因組DNA的提取37℃,150r/min培養(yǎng)72h。取出,在超凈臺中用無菌菌株接入發(fā)酵培養(yǎng)基,培養(yǎng)至對數生長期后期,[8]生理鹽水進行梯度稀釋。8000r/min,5min,離心收集菌體,參照文獻提取基2.2菌種的初篩因組DNA。富集培養(yǎng)液梯度稀釋后涂布于初篩培養(yǎng)基平板2.6.216S223
