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1、血清HBV-DNA定量與HBV血清標(biāo)志物的相關(guān)性研究黃錦蓮(福建省沙縣醫(yī)院365500)【摘要】目的探討HBV血清標(biāo)志物ELISA法與乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBV-DNA)熒光定量檢測(cè)的關(guān)系。方法采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)HBV-DNA含量，同時(shí)用ELISA法檢測(cè)HBV血清標(biāo)志物。結(jié)果HBsAgHBeAgHBcAb陽性組患者血清中HBV-DNA陽性率要明顯高于HBsAgHBeAbHBcAb陽性組患者，HBeAg與HBV-DNA拷貝數(shù)有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論血清中HBV-DN
2、A含量與乙肝免疫標(biāo)志物之間存在密切的關(guān)系，在各種HBV模式中，以HBeAg陽性者的病毒復(fù)制水平最高。ELISA法不能直接反應(yīng)乙肝患者血清中的病毒含量，PCR檢測(cè)可以體現(xiàn)病毒的復(fù)制情況，對(duì)乙肝的早期診斷、制定治療方案、尤其是對(duì)抗病毒治療的療效觀察有重要的治療意義?！娟P(guān)鍵詞】HBV聚合酶鏈反應(yīng)HBV-DNA血清標(biāo)志物【中圖分類號(hào)】R446.ll［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752(2012)35-0163-01乙型肝炎病毒的感染可引起一系列疾病的發(fā)牛，是世界上最常見的傳染病之一，可從無癥狀的病
3、毒攜帶者或隱形感染者到急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝癌。在我國60%的人受過HBV感染，在現(xiàn)患慢性肝炎患者中約80%以上為慢性乙型肝炎患者，而受HBV慢性感染的人群患原發(fā)性肝癌的危險(xiǎn)性相對(duì)增高。所以，加強(qiáng)對(duì)HBV的防治顯得十分重要。當(dāng)前，臨床上HBV感染的診斷主要來源于HBV血清免疫標(biāo)志物ELISA法與HBV-DNA熒光定量檢測(cè)。HBV血清免疫標(biāo)志物(HBVM)反映的是機(jī)體對(duì)HBV的免疫反應(yīng)強(qiáng)度，HBV-DNA是血清中HBV存在與復(fù)制的直接標(biāo)志。木文通過對(duì)306例乙型肝炎患者HBV血清免疫標(biāo)志
4、物表達(dá)情況以及HBV?DNA含量來研究機(jī)體針對(duì)HBV的免疫反應(yīng)強(qiáng)度、HBV復(fù)制程度之間的關(guān)系，幫助臨床醫(yī)牛更準(zhǔn)確診斷HBV的感染，對(duì)判斷患者的病情、預(yù)后及抗病毒治療有重要的指導(dǎo)作用。1材料與方法1.1檢測(cè)對(duì)象306例乙型肝炎患者為我院的住院及門診病人。年齡8歲?75歲，平均44.5歲，其中男性210例，女性96例。1.2方法1.2.1HBV-DNA熒光定量PCR檢測(cè)采用廈門安普利公司Amplly2400型擴(kuò)增儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR診斷試劑盒購自廈門安普利HBV-DNA原裝配套試劑。(1)HBV-D
5、NA模板提?。喝⊙鍢颖?0ul,加入裂解液lOOul,裂解液使用前應(yīng)振搖混懸，然后分別加入待測(cè)標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品50ul,混懸，室溫靜置lOmin；10000g離心25s,去上清；加入150ul洗滌液，混懸，10000g離心25s,去上清；加入150ul重復(fù)洗滌液，混懸，10000g離心25s,去上清備用。(2)加樣:步驟(1)制備的沉淀分別用反應(yīng)緩沖液30ul混懸，取25ul加入反應(yīng)管中，混勻，稍微離心，置入熒光PCR擴(kuò)增儀內(nèi)。(3)上機(jī)檢測(cè)：38°C5min,95°C10min；進(jìn)入以下循環(huán)：95°
6、C15s,58°C50s(30s后讀熒光)，40循環(huán)。以每毫升DNA拷貝數(shù)表示HBV-DNA含量。1.2.2血清標(biāo)志物側(cè)定采用ELISA方法檢測(cè)HBV標(biāo)志物。ELISA試劑盒購自廈門英科新創(chuàng)有限公司，操作按說明書。2結(jié)果306例血清標(biāo)本根據(jù)HBVM的模式情況及HBV-DNA檢出的結(jié)果不同，進(jìn)行分組，其結(jié)果見表表1HBV?DNA定量結(jié)果與ELISA法檢測(cè)結(jié)果的比較HBVM類型例數(shù)HBV-DNA陽性數(shù)HBV?DNA陽性率(％)1、HBsAgHBeAgHBcAb陽性組1019695.12、HBsAgHBe
7、AbHBcAb陽性組1236754.53、HBsAgHBcAb陽性組794658.24、HBcAb陽性組303討論本文對(duì)306例乙型肝炎患者進(jìn)行血清免疫標(biāo)志物和HBV?DNA熒光定量PCR檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HBV血清標(biāo)志物陽性不同的模式中存在不同的病毒復(fù)制，HBsAgHBeAgHBcAb陽性組HBV?DNA熒光定量PCR檢出率95.1%,其HBV-DNA拷貝數(shù)顯著高于其他組(P<0.05),說明這種乙肝病毒血清標(biāo)志物模式陽性者具有很強(qiáng)的傳染性，HBVM中HBeAg陽性乙肝患者HBV均處于大量復(fù)制階
8、段，提示患者具有高度傳染性，與文獻(xiàn)⑴報(bào)道一致，這也從基因水平證實(shí)了HBeAg是HBV復(fù)制和傳染性的良好指標(biāo)。雖然在HBeAg陽性組中，有近4.9%的病人HBV-DNA陰性，但這些患者中多數(shù)人是由于正在使用抗病毒藥物治療或治療后的患者血清；在HBsAgHBeAbHBcAb陽性組中陽性率54.5%,HBsAgHBcAb陽性組陽性率58.2%,HBV-DNA拷貝數(shù)差異很人，說明ELISA檢測(cè)結(jié)果相同的病人,其體內(nèi)HBV?DNA復(fù)制情況存在很大差異。一般認(rèn)為HBeAb持續(xù)陽性
