熒光定量PCR檢測HBV-DNA載量與HBV-M常見模式相關(guān)性探討

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1、熒光定量PCR檢測HBV-DNA載量與HBV-M常見模式相關(guān)性探討梁勇彪?yún)^(qū)倩萍蒙春華(南寧市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科廣西南寧530031)【摘要】目的：探討熒光定量PCR檢測HBV-DNA載量與乙肝病毒標(biāo)志物常見模式的關(guān)系。方法：回顧性分析同時(shí)檢測乙型肝炎病毒和熒光定量PCR255例患者，統(tǒng)計(jì)HBV–DNA檢測含量值和酶聯(lián)免疫吸附檢測的HBV–M模式值，進(jìn)行對比。結(jié)果：53例大三陽標(biāo)本屮，HBV–DNA陽性47例平均拷貝數(shù)為2.25×107/ml;在7例HBsAg、HBeAg標(biāo)志物陽性的標(biāo)本中,HBVDNA陽性5

2、例，平均拷貝數(shù)5.40×106/ml;在57例小三陽標(biāo)本?HBV?DNA陽性者為24例,平均拷貝數(shù)為7.69×10/ml;W在122例HBV-M標(biāo)志物全陰性的標(biāo)本中，仍有3例檢HiHBV-DNA陽性,平均拷貝數(shù)為4.54×10/mL結(jié)論在各種HBV標(biāo)志物模式中，以HBeAg陽性者的病毒復(fù)制水平最高，熒光定量PCR檢測HBV?DNA載量可表達(dá)HBV感染和復(fù)制狀態(tài)?！娟P(guān)鍵詞】HBV-DNA載量；熒光定量PCR；HBV–M模式；標(biāo)志物【屮圖分類號】R512C文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8231(2011)

3、10-1477-02屮國有13億慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者，是傳染性肝炎的高發(fā)地區(qū)。其屮約有2000萬是需要抗病毒治療的慢性進(jìn)展性肝病患者［1］。冃前HBVM模式感染復(fù)制情況難以判斷，實(shí)時(shí)熒光定量PCR的應(yīng)甩使HBV-DNA檢測得到準(zhǔn)確量化，為臨床醫(yī)生對乙肝的診斷、治療和預(yù)后判斷提供可靠依據(jù)。為進(jìn)一步了解HBV-DNA定量檢測與乙肝患者HBV標(biāo)志物(HBV?M)Z間的關(guān)系,對同步檢測乙型肝炎病毒和熒光定量PCR255份血清標(biāo)本檢測結(jié)果進(jìn)行比較和分析如下。1資料與方法1.1標(biāo)本來源:255例標(biāo)本均為兩年來我院檢測HBV-M,并同時(shí)做HBV-DNA檢測

4、的患者。1.2儀器與試劑:HBV-M:儀器為RT-2100C酶標(biāo)儀（深圳雷杜）和洗板機(jī)（iwo-960Autobio安圖）：HH.W21.600S型數(shù)顯電熱恒溫水溫箱和ZW-A型微量振蕩器（金壇市科析儀器有限公司）,HBsAg試劑（上海科華生物工程股份有限公司）。HBV-DNA的檢測儀：美國生產(chǎn)的ABI7300型實(shí)吋熒光定量PCR儀。試劑盒由廣州中山醫(yī)科大學(xué)達(dá)安基因診斷中心提供PCRHBV試劑盒。1.3檢測方法:HBV-M采用ELISA法,HBV-DNA采用熒光定量PCR技術(shù)，嚴(yán)格按試劑盒說明操作并執(zhí)行質(zhì)控。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包

5、進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。兩樣本均數(shù)分析采用t檢驗(yàn)，P&It;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。如表1。2結(jié)果255例標(biāo)本按HBV?M常見模式分為6個(gè)類型，分別統(tǒng)計(jì)HBV?DNA檢測陽性率及HBV-DNA含量，進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)吋，拷貝數(shù)<1000的標(biāo)本不參加均值計(jì)算”結(jié)果見表結(jié)果顯示:255例HBV-DNA載量高于1000拷貝/ml血清的病例中有85例。表1255乙型肝炎血清HBV?M模式與HBVDNA定量結(jié)果的對比3討論冋顧性分析同步檢測乙型肝炎病毒和熒光定量PCR255例患者，統(tǒng)計(jì)HBV–DNA檢測含量值和酶聯(lián)免疫吸附檢測的HBV–M模式值，

6、HBV-M陽性133例;HBVDNA陽性85例。其中53例模式1血清標(biāo)本中檢測到HBVDNA陽性48例，檢出率達(dá)90.57%,模式2中HBVDNA檢出率為85.71%明顯高于其它各組（P&It;0.05）,顯示HBV復(fù)制與HBeAg存在某種聯(lián)系［2］;但,HBeAg陽性組60例中仍有6例（10%）HBVDNA檢測結(jié)果陰性，亦有可能與E系統(tǒng)檢測的試劑質(zhì)量有關(guān)［1］。在57例模式3中‘有24例檢出HBVDNA,檢出率達(dá)42.11%,據(jù)導(dǎo)這類乙肝陽性率差異較大，從13%?63%不等［3］o這可能與HBVDNA檢測方法、被研究人群等因素有關(guān)。這種類型病人不論是乙

7、肝病毒復(fù)制終止，還是復(fù)制水平降低”都有一定的傳染性［4］。表中第8種模式乙肝標(biāo)志物全部陰性的122例血清中,HBV-DNA陽性的有3例（2.46%）,可能是HBV-DNA先于其它血清標(biāo)志物于血中出現(xiàn)，也可能是在部分HBV感染人群中HBsAg呈低水平存在，而采用的ELISA法對這類人群易造成漏檢。在各種HBV標(biāo)志物模式中,以HBeAg陽性者的病毒復(fù)制水平最高，熒光定量PCR檢測HBV-DNA載量可表達(dá)HBV感染和復(fù)制狀態(tài)。熒光定量PCR法靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確，能反映HBV真實(shí)感染和復(fù)制狀態(tài)，對乙肝的治療方案選擇、療效觀察、預(yù)后判斷具有重要的指導(dǎo)意義

8、。參考文獻(xiàn)[1]丁友法，王偉.雜交酶聯(lián)定量PCR檢測HBV-DNA的初步應(yīng)用[j