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1、生物大分子?酶相關生化實驗報告小組成員：王書洋張斌賈官斐楊獅左天宇單位：武警后勤學院臨床醫(yī)學系四隊四班郵編：300162關鍵詞淀粉酶；活性；溫度；抑制劑；激活劑；專—?性【前言】口前臨床主耍以檢測指標作為依據(jù)對疾病的診斷作出較為準確的判斷。其中，學上的應用占了和當一部分。所以，從臨床疾病診斷以及治療的角度去對陸學知識的具體化了解和應用深化是十分有必要的。酶是高效催化有機體新陳代謝各步反應的活性蛋口，兒乎所有的生化反應都離不開酶的催化。因此，一切對蛋片質活性有影響的因素都影響酶的活性。酶與底物作用的活性，
2、受溫度、pH值、酶液濃度、底物濃度、酶的激活劑或抑制劑等許多因素的影響。對酶活性的測定對臨床診斷以及基礎醫(yī)學的研究都有著重要意義。很多酶其實包含兒種貝有同樣催化效用的蛋白質，但它們的分子組成、理化性質與免疫學特性卻有明顯差界,這類蛋白質統(tǒng)稱為該酶的同工酚。同工酶在組織和器官中的分布不同，通過測定不同同工酶的含量與活性的變化，可以推算出改組織和器官的變化。木綜述旨在對示文的三次實驗作為基礎醫(yī)學和臨床醫(yī)學的一次應用上的聯(lián)系。實驗一影響酶促反應速度的因素【實驗原理】唾液淀粉酶催化淀粉水解牛?成各種糊楮和麥芽糖
3、。淀粉溶液與碘反應呈藍色；糊粕根據(jù)分子大小，為碘反應分別呈藍、紫、紅、無色等不同的顏色；麥芽糖不少碘呈色。唾液淀粉酶的活性受溫度、酸堿度、抑制劑與激活劑等的影響。溫度：溫度降低，酶促反應減弱或停止；溫度升高，反應速度加快。當上升至某一溫度時，酶促反應速度達最人值，此溫度稱為酶的最適溫度。山于酶的化學木質是蛋口質，溫度過高會導致蛋白質構象的改變，因此如果溫度繼續(xù)升高，反應速度反而會迅速下降甚至完全喪失。酸堿度：唾液淀粉酚授適pll為PII6.9,高于或低于酶的最適pll值，都將引起酶活性的降低，過酸或過堿
4、的反應條件可使酶活性喪失。抑制劑與激活劑：酶的活性常受某些物質的影響，能增加酶的活性稱為酶的激活劑：降低酶活性不使酶蛋白變性的稱為酶的抑制劑。如C1為唾液淀粉酶的激活劑，C+為唾液淀粉酶的抑制劑。根據(jù)上述性質，可以用碘檢查淀粉是否水解及其水解程度，間接判斷唾液淀粉酚是否存在及其活性大小。【標本】唾液【測定方法】試劑:1%淀粉溶液，1%氯化鈉溶液，1%硫酸銅溶液，1%硫酸鈉溶液，碘液，磷酸氫二鈉(0.2mmol/L),檸檬酸溶液(0.lmmol/L)o器材：試管，試管夾，恒溫水浴鍋(37°C),吸管，滴管
5、，試管架，操作：1.收集唾液：實驗者先將痰咳盡，用自來水漱口，清除口腔內(nèi)食物殘渣，再含蒸僧水約15汕，作口IL嚼咕漱運動，3min后葉入墊有兩層經(jīng)潤濕處理的脫脂紗布的漏斗內(nèi)，過濾氣泡及食物殘渣后于小燒杯屮備用。2.觀察溫度對卿促反應速度的影響収試管3支，編號1,2,3,按下表操作:試劑(ml)123①唾液111(21%淀粉222①②水浴5min100°C(冷卻)37°C0°C①0混合水浴5min100°C37°Co°c碘液1滴(冷卻)1滴1滴3.觀察pH對酶促反應速度的影響(1)配制一系列pH不等的緩沖
6、液。試劑(ml)1230.2mmol/L磷酸氫二鈉5.157.729.720.lmmol/L檸檬酸4.852.280.28pH5.006.808.00(2)取試管3支，編號1,2,3,按下表操作:試劑(ml)123睡液222緩沖液3(pH5.00)3(pH6.80)3(pH8.00)1%淀粉22237°C水浴lOmin碘液1滴1滴1滴4觀察激活劑和抑制劑對酚促反應速度的影響取試管4支，編號1,2,3,4,按卜?表操作：試劑滴12341%淀粉20202020唾液10101010蒸懈水6———1%氯化鈉—6
7、——1%硫酸銅——6—1%硫酸鈉———637°C水浴5—10min碘液1滴1滴1滴1滴【結果及討論】溫度對酶促反應的影響：此組實驗的三個試管模擬人體的環(huán)境即近屮性，通過觀察不同溫度下酶活性強弱，證明溫度對酶活性冇很大影響。1號試管的顏色變化比較大，無色時淀粉被完全分解為單糖，晴褐色時淀粉不完全分解，藍色時淀粉完全沒被分解，淺藍色時少許被分解；也就是說不同人的唾液淀粉酶活性在100°C時受影響的程度不同，有的被完全抑制，有的部分受影響，而有的和在37°c時相比兒乎無變化。2號試管無色，說明淀粉完全被分解為
8、單糖，不能與碘發(fā)生顏色反應；通觀3號試管發(fā)現(xiàn)唾液淀粉酚活性在0°C時人都被抑制，或是完全被抑制或是大部分被抑制。pH值對酶促反應的影響：此組實驗在37°CF設置三個pH值：5.0（酸性）、6.8（近中性）和8.0（堿性）。通過各個試管的顏色判斷酶活性強弱。酶活性比較強吋，淀粉完全分解，顯示無色或碘液的淺黃色；號試管顏色相近，酶活性比較弱時，淀粉不能被完全分解，依被分解的程度不同顯示不同的顏色。相比較1均為晴褐色，說明其中的淀粉被分解為多糖，
