ABO血型鑒定(生理鹽水法)

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1、ABO血型鑒定（生理鹽水法）ABO血型鑒定（生理鹽水法）2009-01-2214:07【大中小】【我要糾錯(cuò)】1.原理根據(jù)紅細(xì)胞上有或無(wú)A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及0型卩L

2、種。A型紅細(xì)胞膜上含有A抗原，B型紅細(xì)胞膜上含有B抗原，AB型紅細(xì)胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B試劑是分別針對(duì)A抗原和B抗原的特異性抗體?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知的抗A、抗B試劑與受檢者的紅細(xì)胞混合時(shí)，與抗A試劑發(fā)生凝集者即為A型，與抗B分型試劑發(fā)生凝集者即為B型，與抗A、抗B試劑均發(fā)生凝集者即為AB型，與抗A、抗B試劑均不凝

3、集者即為0型。所謂反定型，是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗一A或/和抗一B.2.標(biāo)本采集2.1標(biāo)本種類：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。2標(biāo)本要求：1抗凝劑：如用抗凝血，多主張用EDTAK2（mg/dL）抗凝。2.2.2用手指末梢血作血型檢測(cè)時(shí)，最少樣品量為lOOul,如手指有凍瘡，則主張米耳垂血。標(biāo)本儲(chǔ)存：2小時(shí)內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)，室溫放置下不超過(guò)8小時(shí)，4°C-8°C保存不超過(guò)48小時(shí)。標(biāo)本運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染、溶血標(biāo)本不能作測(cè)定試劑1試劑名稱:ABO血型檢測(cè)試劑6.2試劑生產(chǎn)廠家：南京華欣藥業(yè)生物工程有限公司????????????3試劑組

4、成試劑1：抗A分型試劑（藍(lán)色），效價(jià)1：128,2°C-8°C避光保存,室溫放置不宜過(guò)久。試劑2：抗B分型試劑（黃色），效價(jià)1：128,2°C-8°C避光保存,室溫放置不宜過(guò)久。試劑3：5%A、B及0型紅細(xì)胞鹽水懸液，自制。配制方法：分別采取已知A、B、0三種血型的紅細(xì)胞，經(jīng)鹽水洗滌3次，以壓積紅細(xì)胞配成不同濃度的紅細(xì)胞懸液。紅細(xì)胞懸液的配制懸液濃度（％）壓積紅細(xì)胞（滴）鹽水（滴）102011112ml(40)0.8ml(16)0.4ml(8)0.2ml(4)為了防止紅細(xì)胞懸液敏感性不一致，可隨機(jī)采取3個(gè)或以上的健康成人血液，按A、B、0型分別混合后，按上法制備。???

5、?????????操作步驟1玻片法1.1取清潔玻片1張（或白瓷板1塊），用肥皂水刷洗后晾干,用蠟筆劃出小格，并注明A、B字樣。將抗A試劑、抗B試劑各一滴分別滴于玻片（或瓷盤）上A、B處。分別取等體積待檢血樣（5%-10%紅細(xì)胞懸液或全血）于抗A試劑和抗B試劑。7.1.2另取潔凈玻片1張（或白瓷板1塊），用蠟筆劃成方格，標(biāo)明A細(xì)胞、B細(xì)胞和0細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和0型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。7.1.3用不同的竹簽將分型試劑與待檢血樣調(diào)勻，同吋不停的搖動(dòng)玻片（或瓷盤）并觀察血型凝集（或溶血）反應(yīng)。如以玻片做試驗(yàn)吋，也可用低倍鏡觀察結(jié)果。7.2試

6、管法1取潔凈小試管（內(nèi)徑1OmmX60mm）2支，分別標(biāo)上A、B字樣，用滴管分別向A管滴加抗A分型試劑1滴。向B管滴加抗B分型試劑1滴。向A、B管各滴加待檢血樣的5%紅細(xì)胞懸液各1滴，混合。7.2.2另取潔凈小試管（內(nèi)徑10mmX60mm）3支,分別標(biāo)明A、B和0細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B和0型5%紅細(xì)胞懸液1滴，混合。7.2.3搖勻后以1000轉(zhuǎn)/分的速度離心1分鐘判定結(jié)果。將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無(wú)凝集（或溶血）現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。結(jié)果判斷1觀察結(jié)果吋既要

7、看有無(wú)凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于A、B亞型、類B或cisAB的發(fā)現(xiàn)。????????????2凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)：4+=紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3+=紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清詢清晰。2+=紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。1+=肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。土二鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。皿尺=混合凝集外觀是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而絕大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布?！硎娟幮裕R下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。8.3按下表報(bào)告受檢者紅細(xì)胞ABO血型ABO血型正反定型結(jié)果分型血清+受檢者紅細(xì)胞受檢者受檢者血清+試劑紅細(xì)胞+抗

8、一A+B++血型AB0ABA細(xì)胞0細(xì)胞9?臨床意義：輸血、器官移植與親子鑒定10.操作性能：快速簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好。11超出范圍結(jié)果處理11.1紅細(xì)胞自凝：冷凝集系增高是最為常見原因。應(yīng)用37°C-40°C的4:理鹽水洗滌紅細(xì)胞可去除紅細(xì)胞表面附著的導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集的冷集素。11.2正反定型結(jié)果不一致原因1分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗一A血清效價(jià)不高，可將A亞型誤定為0型，AB型誤定為B型。11.2.2紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或過(guò)淡，抗原抗體比例則不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。11.2.3受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過(guò)少（如亞