KJ 201702 食品中嘔吐毒素的快速檢測(cè)膠體金免疫層析法

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1、附件2食品中嘔吐毒素的快速檢測(cè)膠體金免疫層析法（KJ201702）1范圍本方法規(guī)定了食品中嘔吐毒素的膠體金免疫層析快速檢測(cè)方法。本方法適用于谷物加工品及谷物碾磨加工品中嘔吐毒素的快速測(cè)定。2原理樣品中嘔吐毒素與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和與檢測(cè)卡中檢測(cè)線（T線）上嘔吐毒素-BSA偶聯(lián)物的免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致檢測(cè)線顏色深淺的變化。通過檢測(cè)線與控制線（C線）顏色深淺比較，對(duì)樣品中嘔吐毒素進(jìn)行定性判定。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。3.1試劑3.1.1提取液：水或膠體金免疫層析檢測(cè)卡專用提取液。3.1.2甲醇。3.2參考物質(zhì)嘔吐毒素參

2、考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量見表1，純度≥99%。表1嘔吐毒素參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量中文名稱英文名稱CAS登錄號(hào)分子式相對(duì)分子量脫氧雪腐鐮刀菌烯醇Deoxynivalenol51481-10-8C15H20O6296.32注：或等同可溯源物質(zhì)。3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制準(zhǔn)確稱取適量嘔吐毒素參考物質(zhì)（精確至0.0001g），用甲醇溶解，配成0.10mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-20℃保存，有效期3個(gè)月。3.4材料3.4.1嘔吐毒素膠體金免疫層析檢測(cè)卡。3.4.2中速定性濾紙。3.4.3濾膜：0.45μm水相濾膜。4儀器及設(shè)備4.1天平

3、：感量分別為0.01g和0.0001g。4.2粉碎機(jī)。4.3樣品篩：0.9mm。4.4漩渦混合器：1500rpm/min。4.5移液器：100μL，200μL，1.0mL。4.6恒溫裝置：37.0℃±2.0℃。4.7環(huán)境條件：溫度15-30℃，濕度≤80%。5分析步驟5.1試樣制備樣品粉碎：將待測(cè)樣品粉碎，過0.9mm樣品篩，充分混合均勻，備用。5.2試樣提取準(zhǔn)確稱取粉碎混勻樣品5.0g于離心管中，加入25.0mL水或?qū)Ｓ锰崛∫海?.1.1），漩渦混合器（4.4）提取5min，靜置1min，中速定性濾紙（3.4.2）過濾，濾液用0.45μm水相濾膜（3.4.3）過濾，將濾液稀釋至檢測(cè)卡（3.

4、4.1）檢測(cè)范圍內(nèi)，混勻，即得待測(cè)液。5.3測(cè)定步驟吸取150μL上述待測(cè)液加入到檢測(cè)卡中，恒溫裝置內(nèi)反應(yīng)6min后進(jìn)行結(jié)果判定。5.4質(zhì)控實(shí)驗(yàn)每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。5.4.1空白試驗(yàn)稱取空白試樣，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。5.4.2加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)準(zhǔn)確稱取空白試樣5.0g或適量（精確至0.01g）置于離心管中，加入適量嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，使嘔吐毒素濃度為1.0mg/kg，按照5.2和5.3步驟與樣品同法操作。6結(jié)果判定要求根據(jù)控制線（C線）和檢測(cè)線（T線）顏色變化進(jìn)行結(jié)果判定，采用目測(cè)法對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定，比色法和消線法判定原則如下：6.1比色法6.1.1無效控制線（

5、C線）不顯色，無論檢測(cè)卡（T線）是否顯色，表示操作不正確或檢測(cè)卡已失效。6.1.2陽(yáng)性結(jié)果控制線（C線）顯色，檢測(cè)線（T線）顯色明顯淺于控制線（C線），判為陽(yáng)性。6.1.3陰性結(jié)果控制線（C線）顯色，檢測(cè)線（T線）比控制線（C線）顯色深或檢測(cè)線（T線）與控制線（C線）顯色基本一致，判為陰性。圖1比色法結(jié)果判定示意圖6.2消線法6.2.1無效控制線（C線）不顯色，無論檢測(cè)卡（T線）是否顯色，表示操作不正確或檢測(cè)卡已失效。6.2.2陽(yáng)性結(jié)果控制線（C線）顯色，檢測(cè)線（T線）不顯色，判為陽(yáng)性。6.2.3陰性結(jié)果控制線（C線）顯色，檢測(cè)線（T線）顯色，判為陰性。圖2消線法結(jié)果判定示意圖6.3質(zhì)控樣品

6、要求空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。7結(jié)論當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行確證。8性能指標(biāo)8.1檢測(cè)限：嘔吐毒素為1.0mg/kg。8.2判定限：嘔吐毒素為0.9mg/kg。8.3假陰性率：≤5%。8.4假陽(yáng)性率：≤10%。注：假陽(yáng)性率和假陰性率計(jì)算方法參照《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（食藥監(jiān)辦科〔2017〕43號(hào)）執(zhí)行。9其他本方法測(cè)定步驟和結(jié)果判讀也可以根據(jù)廠家檢測(cè)卡的說明書進(jìn)行，但應(yīng)符合或優(yōu)于本方法規(guī)定的性能指標(biāo)。本方法參比方法為GB5009.111-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的測(cè)定》。本方法負(fù)責(zé)起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)

7、院油料作物研究所。驗(yàn)證單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，南京工業(yè)大學(xué)食品與輕工學(xué)院，湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院。主要起草人：李培武、王督、陳愛亮、施祖灝、范志勇。