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《KJ 201707 食品中嗎啡、可待因成分的快速檢測膠體金免疫層析法》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、附件1食品中嗎啡、可待因的快速檢測膠體金免疫層析法(KJ201707)1范圍本方法規(guī)定了食品中嗎啡、可待因的膠體金免疫層析快速檢測方法。本方法適用于經(jīng)調(diào)味料、火鍋底料、麻辣燙底料或其他食用湯料等勾兌、調(diào)配或添加形成的液體食品;經(jīng)調(diào)味醬、調(diào)味油脂、火鍋底料、麻辣燙底料、蘸料或其他調(diào)味料等勾兌、調(diào)配或添加形成的半固體食品,醬油;經(jīng)香辛香料、復(fù)合調(diào)味料等勾兌、調(diào)配或添加形成的固體食品,食用醋(含以食用醋為主的調(diào)味料)中嗎啡、可待因的快速測定。2原理本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的嗎啡、可待因經(jīng)水提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合,抑制抗體和
2、檢測線(T線)上抗原的結(jié)合,導(dǎo)致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與控制線(C線)顏色深淺比較,對樣品中嗎啡、可待因進(jìn)行定性判定。3試劑與材料除另有規(guī)定外,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的三級水。3.1試劑甲醇。3.2參考物質(zhì)嗎啡、可待因參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見表1,純度均≥99%。表1嗎啡、可待因參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量序號中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子量1嗎啡Morphine57-27-2C17H19NO3285.34C18H21N
3、O3?H3PO42磷酸可待因CodeinePhosphate41444-62-6424.39?3/2H2O注:或等同可溯源物質(zhì)?!?——3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.3.1嗎啡、可待因標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1mg/mL):精密稱取適量嗎啡、可待因參考物質(zhì)(3.2),用甲醇(3.1)溶解并稀釋至刻度,搖勻,分別制成濃度為1mg/mL的嗎啡、可待因標(biāo)準(zhǔn)儲備液。-20℃避光保存,有效期1年。3.3.2嗎啡、可待因標(biāo)準(zhǔn)中間液(10μg/mL):精密移取嗎啡、可待因標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1mg/mL)(3.3.1)1mL分別置于100mL容量瓶中,用甲醇(3.1)稀釋至刻度,搖勻
4、,制成濃度為10μg/mL的嗎啡、可待因標(biāo)準(zhǔn)中間液。-20℃避光保存,有效期3個月。3.3.3嗎啡、可待因標(biāo)準(zhǔn)工作液(1μg/mL):精密移取嗎啡、可待因標(biāo)準(zhǔn)中間液(10μg/mL)(3.3.2)1mL分別置于10mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為1μg/mL的嗎啡、可待因標(biāo)準(zhǔn)工作液。4℃避光保存,有效期1個月。3.4材料嗎啡、可待因膠體金免疫層析檢測卡,及配套的試劑(可選),適用基質(zhì)為食品。4儀器和設(shè)備4.1天平:感量為0.01g。4.2讀數(shù)儀:產(chǎn)品配套可使用的檢測儀器(可選)。4.3環(huán)境條件:溫度10—40℃,相對濕度≤80%
5、。5分析步驟5.1試樣制備取適量樣品,液體樣品或半固體樣品充分混勻,固體樣品充分粉碎混勻。5.2試樣提取和凈化5.2.1液體食品:吸取試樣(盡量避免吸取油脂層)測定。層析展不開時,用0.45μm微孔濾膜過濾后測定。5.2.2半固體食品及醬油:準(zhǔn)確稱取試樣1g±0.1g于15mL具塞離心管中,加2—3mL水,大力振搖至均勻(必要時置約70℃水浴加熱),靜置5—10min,吸取水層(盡量避免吸取油脂層或沉淀)測定。層析展不開時,用0.45μm微孔濾膜過濾后測定。5.2.3固體食品及食用醋:準(zhǔn)確稱取試樣1g±0.1g于15mL具塞離心管中,加8—1
6、0mL水,大力振搖1—2min至均勻,靜置5—10min,吸取水層測定。層析展不開時,用0.45μm微孔濾膜過濾后測定。注:試樣提取和凈化(5.2)過程可按照試劑盒說明書,不做限定。5.3測定步驟測試前,將未開封的檢測卡恢復(fù)至室溫。緩慢滴加3—4滴待測溶液至檢測卡加樣孔中,靜置,5—10min內(nèi)對結(jié)果進(jìn)行判定。注:測定步驟建議按照試劑盒說明書。—2——5.4質(zhì)控試驗每批樣品應(yīng)同時進(jìn)行空白試驗和加標(biāo)質(zhì)控試驗。5.4.1空白試驗:準(zhǔn)確稱取空白試樣1g±0.1g,按照5.2和5.3步驟與試樣同法操作。5.4.2加標(biāo)質(zhì)控試驗:稱取空白試樣,分別添加適
7、量標(biāo)準(zhǔn)工作液(3.3.3),使液體、半固體試樣或醬油試樣中嗎啡、可待因含量均為40μg/kg,使固體或食用醋試樣中嗎啡、可待因含量均為100μg/kg,按照5.2和5.3步驟與試樣同法操作。注:根據(jù)每次試驗時的基質(zhì)類型做相應(yīng)的基質(zhì)加標(biāo)質(zhì)控試驗。6結(jié)果判定要求采用目視法對結(jié)果進(jìn)行判定,示意圖如圖1和圖2所示。結(jié)果判定也可使用膠體金讀數(shù)儀,具體操作與判定原則參照讀數(shù)儀使用說明書。結(jié)果判定建議按照試劑盒說明書。6.1比色法6.1.1無效控制線(C線)不顯色,無論檢測線(T線)是否顯色,表示操作不正確或檢測卡已失效。6.1.2陰性結(jié)果控制線(C線)顯
8、色,檢測線(T線)顏色比控制線(C線)顏色深或檢測線(T線)顏色與控制線(C線)顏色相當(dāng),均表示樣品中不含嗎啡、可待因或含量低于方法檢測限,判為陰性。6.1.3陽性