Micro RNA靶向Wnt信號通路抑制腎細胞癌增殖和侵襲作用機制的研究

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1、未經本論文作者的書面授權，依法收存和保管本論文書面版本＇、電子版本的任何單位和個人，均不得對本論文的全部或部分內容進行任何形式的復制、修改、發(fā)行、出租、改編等有礙作者著作權的商業(yè)性使用（但純學術性使用不在此限）。否則，應承擔侵權的法律責任。吉林大學博士學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交學位論文，是本人在指導教師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明

2、的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：２０１８年１２月０２日MicroRNA靶向Wnt信號通路抑制腎細胞癌增殖和侵襲作用機制的研究ThemechanismofMicroRNAinhibitsproliferationandinvasionofrenalcellcarcinomacellsthroughtargetingWntsignalingpathway作者姓名：宋海濤專業(yè)名稱：泌尿外科研究方向：腎癌基因靶向治療指導教師：孔祥波主任醫(yī)師學位類別：醫(yī)學博士培養(yǎng)單位：吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院論文答辯日期：2018年11月27日授予學位日期：年月日

3、答辯委員會組成：姓名職稱工作單位主席房學東教授吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院委員麻彤輝教授南京中醫(yī)藥大學醫(yī)學與生命科學學院李玉新教授東北師范大學生命科學學院柳林教授吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院王輝教授吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院中文摘要MicroRNA靶向Wnt信號通路抑制腎細胞癌增殖和侵襲作用機制的研究背景：腎細胞癌是成人腎臟腫瘤中常見的疾病，大約占腎部腫瘤的90%，在成人癌癥中大約占3%。其發(fā)病率、死亡率近些年呈現(xiàn)增加趨勢。腎細胞癌是一種棘手的癌性疾病，很多患者通常伴隨著腫瘤轉移及治療后復發(fā)。目前，針對腎細胞癌的發(fā)病分子機制還處于未知狀態(tài)，且缺少有效的治療手段。所以，針對腎細胞癌分

4、子機制的研究和尋找特異性分子靶向治療手段成為當前亟須解決的問題。miRNAs是一種沒有編碼的RNA，長度約為22個核苷酸組成，其可以直接靶向3’-UTRmRNA，直接引起mRNA的降解和抑制翻譯過程，在細胞中扮演著調控基因表達的作用。之前很多研究已經證明了miRNAs是癌癥發(fā)生和發(fā)展的主要調控因子，其功能通常為致癌基因或抑癌基因，調控著細胞的分化、侵襲、轉移和凋亡。有研究報道在腎細胞癌中有很多的miRNAs功能紊亂，可能參與腎細胞癌的發(fā)生。因此，miRNAs是腎細胞癌的潛在診斷和預后判斷的生物標記物，同時其也可以作為腎細胞癌的治療靶點。但是miRNAs在腎細胞

5、癌中扮演的角色以及相關分子作用機制尚不清楚，需要進一步的研究進行探討。很多研究發(fā)現(xiàn)AEG-1在很多種癌癥中是一種新型的致癌基因，可以被HIV-1和TNF-α激活。AEG-1在癌癥、肥胖和神經退行性疾病中扮演著重要的角色，在很多癌癥中存在著AEG-1高表達，如胃癌、腸癌、肝癌、膠質瘤和前列腺癌。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)AEG-1能激活很多促進瘤體形成的細胞信號通路。AEG-1能激活MAPK通路，特別是ERK通路，活化后的ERK通路交叉靶向作用于Wnt信號通路，而Wnt/β-catenin是多種腫瘤形成的重要通路。Wnt/β-catenin通路中的LEF-1與β-cateni

6、n形成二聚體而活化，Wnt與FZD結合，通過磷酸化滅活GSK3α/β，導致了β-catenin水平增加，引起核內基因的激活進行轉錄。AEG-1能負調控Wnt的負性調控子APC和CTBP2，同時發(fā)現(xiàn)LEF-1抑制后影響了Wnt對IAEG-1調控，能降低細胞的侵襲能力。FZD7是Wnt/β-catenin信號通路的一個主要的共同受體。在很多癌癥中都存在異常FZD7的表達和異常Wnt/β-catenin信號通路活化。FZD7通過Wnt/β-catenin信號通路調控癌癥的分化、侵襲和轉移。腎細胞癌與Wnt/β-catenin信號通路可能有密切的聯(lián)系，在腎細胞癌組織和

7、細胞株中FZD7有著異常高表達，可能與Wnt介導的腎細胞癌產生有關系。所以，我們認為在腎細胞癌的治療中通過靶向Wnt信號通路是一種可能的治療手段。有研究表明miRNAs與多種癌癥的形成有關，但其在腎細胞癌中的作用目前還不清楚。所以，本研究以腎癌細胞系為研究對象，探討miRNAs在腎細胞癌中的作用機制，確定miRNAs（miR-384、miR-613）是否通過靶向Wnt信號通路影響腎癌細胞的轉歸，進一步確定其是否可以作為一種潛在的新的靶向腎細胞癌治療方法。方法：第一部分：腎細胞癌中miRNA-384靶向AEG-1的研究1.RT-qPCR法檢測腎癌組織和腎癌細胞系

8、中miR-384mRNA的水平；在AC