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《在臨床、血液篩查中應(yīng)用:》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、在臨床、血液篩杳中應(yīng)用:H2002年初國(guó)家下達(dá)有關(guān)文件正武對(duì)PCR技術(shù)用于臨床檢驗(yàn)解禁以來(lái),此項(xiàng)技術(shù)就在全國(guó)多家醫(yī)院如火如荼地推廣開(kāi)。熒光PCR技術(shù)在原理上對(duì)傳統(tǒng)PCR技術(shù)人大改進(jìn),不僅擁冇普通PCR的所冇優(yōu)點(diǎn),還提薛了特界性和敏感度,定量更為準(zhǔn)確可靠,尤其是閉管、雙檢、防污染等特點(diǎn),使得它已具有挑戰(zhàn)、更新、替代傳統(tǒng)PCR技術(shù)的趨勢(shì)。迄今,深圳匹基公司已經(jīng)研究開(kāi)發(fā)出二十多種熒光PCR試劑盒,其中HBV、HCV、[【IV、NG&CT、TB等產(chǎn)品已獲得國(guó)家生產(chǎn)批號(hào),H均通過(guò)北京、上海等地知名大氏院的嚴(yán)格臨床考核,與國(guó)際上公認(rèn)的同類(lèi)產(chǎn)品相比結(jié)果表明已接近或達(dá)到國(guó)際水平。正武大規(guī)模投產(chǎn)后,已在全國(guó)多家
2、醫(yī)院、科研院所、衛(wèi)生部門(mén)、血液制品廠、各地血站等單位推廣使用,具體應(yīng)用于臨床早期診斷、藥物療效觀察、預(yù)后判斷、流行病學(xué)調(diào)查、血液篩查、輸血安全性判斷等方面。植物檢驗(yàn)檢疫:植物檢疫檢疫主要是對(duì)現(xiàn)場(chǎng)檢疫取冋的植物實(shí)體和病、蟲(chóng)、雜草籽樣本于實(shí)驗(yàn)室做進(jìn)一步檢驗(yàn)鑒定。技術(shù)和方法因病、蟲(chóng)、雜草、植物或其產(chǎn)品種類(lèi)的不同而有很大差別。在檢疫肉眼不可見(jiàn)的牛物(除昆山、雜草外的絕大多數(shù)需檢的有害生物)中,經(jīng)典?方法如細(xì)胞培養(yǎng)、形態(tài)觀察及生理生化分類(lèi)等十分耗時(shí)、耗財(cái)而一比冇較大的病原體擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)及對(duì)操作人員構(gòu)成安金隱患。而分子生物學(xué)檢測(cè)方法中核酸雜交技術(shù)址靈敬,但操作過(guò)于復(fù)雜,重復(fù)性不好又需引入放射性同位素因而不適于
3、推廣?;趩慰寺】贵w的免疫學(xué)方法(如酶聯(lián)免疫吸附法ELTSA)靈敏度雖也得到提為,但始終不及熒光PCR方法,并且特異性及樣品的適用范圍(植物物種及部位來(lái)源)也不如后者。H前進(jìn)、岀境或雙邊檢疫協(xié)定所耍求檢疫的梢物病害項(xiàng)H中植物病毒、病原性細(xì)菌、病原性真菌及植物線蟲(chóng)均有十兒、二十兒種,兒乎所有的項(xiàng)目都可以開(kāi)發(fā)岀相應(yīng)的冇針對(duì)的熒光PCR試劑盒,不僅可大大捉高植物檢驗(yàn)檢疫水平,更重要的是爭(zhēng)取寶貴時(shí)間,冇力控制植物病蟲(chóng)害的橫、縱向蔓延。動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫:動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品與人的生活尤為密切相關(guān),根據(jù)不完全統(tǒng)訃,僅是人畜共患的傳染病業(yè)己達(dá)196種,所以動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫工作更不容忽視,它對(duì)保護(hù)公民生命安全具冇非常重耍
4、的現(xiàn)實(shí)意義。比如瘋牛病(BSE)、禽流感(AIV)就是因?yàn)榕c人的健廉相關(guān)而引起I比界范圍內(nèi)的廣泛關(guān)注。忖前采用的檢測(cè)技術(shù)主婆分為兒類(lèi):病原體分離培養(yǎng)技術(shù)、檢測(cè)蛋口的免疫學(xué)技術(shù)、檢測(cè)特殊蛋口功能的生物學(xué)方法(如抗生索、抗除草劑等實(shí)驗(yàn))、核酸(RNA或DNA)檢測(cè)技術(shù)。與檢測(cè)核酸的PCR技術(shù)相比,其它方法的靈敏度、特異性及精確度都明顯不及,而且時(shí)耗又很長(zhǎng)(通常三周至月余),越來(lái)越不適應(yīng)動(dòng)物活體或有保質(zhì)期嚴(yán)格要求的動(dòng)物加工食品快速準(zhǔn)確地判斷檢疫與通關(guān)的需要。對(duì)PCR產(chǎn)物特界片段確認(rèn)方法,冇如電泳、RFLP、序列分析,僅當(dāng)檢測(cè)鑒定少數(shù)樣品、少數(shù)特殊種類(lèi)時(shí)還可負(fù)擔(dān)起相應(yīng)的工作量和財(cái)力。但對(duì)于進(jìn)出境口岸產(chǎn)
5、品檢測(cè)樣品數(shù)量大,種類(lèi)多的特點(diǎn),更需要一種便于機(jī)械化自動(dòng)化、更特異、更靈敏、無(wú)污染、成木乂相對(duì)低廉的PCR產(chǎn)物檢測(cè)方法,而熒光PCR技術(shù)的出現(xiàn)完全可以滿(mǎn)足以上需要,是最有前途的新熨方法,可用于對(duì)輸出國(guó)或地區(qū)、出入境口岸地區(qū)與出入境動(dòng)物內(nèi)地飼養(yǎng)所在地區(qū)動(dòng)物及其加工產(chǎn)品中傳染病病源的監(jiān)測(cè)。目前,深圳匹基公司利用此項(xiàng)先進(jìn)技術(shù),已開(kāi)發(fā).'llATV各亞型(主要是H5、H7和H9)及通用型的熒光PCR檢測(cè)試劑盒,完成了養(yǎng)殖場(chǎng)現(xiàn)場(chǎng)的區(qū)域?qū)嶒?yàn),并通過(guò)專(zhuān)家嚴(yán)格認(rèn)證,此外我們還正積極開(kāi)發(fā)針對(duì)于其它H前迫切需要的國(guó)際獸疫局(OIE)所規(guī)定的-類(lèi)傳染病及寄生蟲(chóng)病病原體檢測(cè)用的試劑盒(如瘋丫病骯病毒(BSE)、新城疫
6、病毒(NDV)、豬瘟病毒(CSFV)、口蹄疫(foot-and-mouthdiseasevirus)等)。我國(guó)最近幾年來(lái),部分地區(qū)陸續(xù)發(fā)生嚴(yán)重的禽流感病進(jìn)的感染,在雞、鴨群中廣為流行,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,對(duì)禽肉出口創(chuàng)匯構(gòu)成巨大的威脅。特別是否港特別行政區(qū)還發(fā)生人的感染,造成人心煌煌,帶來(lái)更深的社會(huì)危害。促進(jìn)對(duì)外貿(mào)易的順利發(fā)展。此外,熒光PCR方法快速診斷方法的建立,也有利于及時(shí)采取有效措施,控制生產(chǎn)場(chǎng)疫情的進(jìn)-步蔓延,將經(jīng)濟(jì)損欠降到最低。食品、飼料衛(wèi)生:動(dòng)物飼料、餌料及人類(lèi)食品的質(zhì)量衛(wèi)生要求有多項(xiàng)與生物學(xué)相關(guān)的規(guī)定,如用作加工生產(chǎn)的動(dòng)物原材料必需持冇非疫區(qū)證明書(shū)和產(chǎn)地檢疫證明書(shū)(適用于所冇生物
7、病原體造成的病例);許多食品生產(chǎn)規(guī)定了單位體積或單位重量細(xì)菌形成單位的上限,大腸桿菌不得超標(biāo),腸道致病菌(沙門(mén)氏菌及志賀氏菌)、其他致病性菌(如金黃色簡(jiǎn)萄球、溶血性鏈球菌)與動(dòng)物寄生蟲(chóng)等有害生物不得檢出;罐頭食品、礦泉水甚至要求商業(yè)無(wú)菌;有些出口產(chǎn)品還需應(yīng)相應(yīng)國(guó)家的要求檢測(cè)葡萄球菌每素、大腸桿菌腸每素、貝毒素等。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)及生化鑒定法耗時(shí)長(zhǎng),不利限時(shí)通關(guān),且靈敏度還有待捉高,特別是對(duì)低含量卻高