組織病理新技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用

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1、?綜述?講座?組織病理新技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用3磊【摘要】隨著現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展和廣泛應(yīng)用,許多新的組織病理技術(shù)和相關(guān)儀器不斷涌現(xiàn)，各學(xué)科之間相互滲透和影響,使病理學(xué)新的研究方法與技術(shù)層岀不窮。這些新技術(shù)、新方法、新儀器的應(yīng)用極大提高了病理學(xué)研究水平和疾病診斷的準(zhǔn)確性。本文簡要介紹組織病理實(shí)驗(yàn)研究與臨床診斷的一些新方法和新技術(shù)?！娟P(guān)鍵詞】免疫組化；原位雜交；多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；顯微切割；激光共聚焦；比較基因組；生物芯片病理學(xué)是醫(yī)學(xué)中一門巫要的橋梁學(xué)科，有約300年的歷史。在18和19世紀(jì)初，人們依賴肉眼和簡單的放大鏡觀察病變

2、組織，產(chǎn)生了器官病理學(xué)。1843年，徳國病理學(xué)家Virchow將顯微鏡用于觀察病變部位組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變，病理學(xué)進(jìn)入細(xì)胞病理學(xué)，隨著切片技術(shù)和染色技術(shù)的發(fā)明，開創(chuàng)了組織病理學(xué)技術(shù)最基本的組織制片利HE染色常規(guī)技術(shù)。20世紀(jì)50年代出現(xiàn)了牛?物組織標(biāo)本制備超薄切片技術(shù)，病理學(xué)研究從細(xì)胞水平深入到亞細(xì)胞水￥，由此產(chǎn)生了超微結(jié)構(gòu)病理。半個多世紀(jì)以來,科學(xué)技術(shù)不斷的進(jìn)步，許多新知識、新理論廣泛應(yīng)用于病理學(xué)各個領(lǐng)域，待別是近20多年一系列相關(guān)新方法、新技術(shù)的相繼建立以及細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、環(huán)境醫(yī)學(xué)、現(xiàn)代免疫學(xué)、現(xiàn)代遺傳學(xué)等新興學(xué)

3、科迅速興起，對病理學(xué)科的發(fā)展產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響，帶來了新的理論和技術(shù)叭一、免疫組織（細(xì)胞）化學(xué)技術(shù)免疫組織化學(xué)（immunohistochemistryJHC）是利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及定余研究的-種技術(shù)方法。免疫組織化學(xué)技術(shù)不僅有較高的敏感性、特異性、簡便性等優(yōu)點(diǎn)，還能將形態(tài)學(xué)改變與功能、代謝變化相結(jié)合，基因水平和蛋白質(zhì)水平檢測相結(jié)合，細(xì)胞水平和超微結(jié)構(gòu)水平相結(jié)合⑵，因此，在所有新技術(shù)中，免疫組

4、織化學(xué)技術(shù)是最重要和最具影響力的一種特殊染色方法，被譽(yù)為病理學(xué)的“棕色革命”。石蠟組織免疫組化技術(shù)的發(fā)展從單克隆抗體以及以酶標(biāo)抗體法為基礎(chǔ)的高敏感ABC試劑問世到1991年發(fā)明的加熱抗原修復(fù)技術(shù)（AR）成為免疫組化發(fā)展史上重要的里程碑⑶。但免疫組化的標(biāo)準(zhǔn)化量化問題尚未解決，王文勇等“：探討免疫組化技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化要從免疫組化染色前技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化（組織固定、取材、脫水、包埋的標(biāo)準(zhǔn)化）；組織制片標(biāo)準(zhǔn)化;抗原修復(fù)標(biāo)準(zhǔn)化;對照實(shí)驗(yàn)正確設(shè)立；試劑標(biāo)準(zhǔn)化（抗體和檢測系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)化）；免疫組化具體操作步驟的標(biāo)準(zhǔn)化;免疫組化染色結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)化;醫(yī)學(xué)實(shí)

5、驗(yàn)室認(rèn)證等方面去實(shí)現(xiàn)?；痦?xiàng)目：安徽中醫(yī)學(xué)院校級質(zhì)量工程-形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心（zlgc200903）作者單位：230000安徽中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院病理教研室此外，全口動免疫組化染色儀的使用可以提高標(biāo)準(zhǔn)化程度?減少手工操作染色帶來的人為溟羞⑶。從現(xiàn)冇科技水￥來看，經(jīng)過努力是完全對能建立起?套切實(shí)町行的怎S：免疫組化技術(shù)，為當(dāng)代個體化靶向治療以及分子醫(yī)學(xué)提供強(qiáng)右?力的工具叫二、原位雜交技術(shù)原位雜交（insiluhybridization,ISH）是應(yīng)用標(biāo)記的已知序列核升酸片段作為探針，通過雜交直接冷組織切片、細(xì)胞涂片或培養(yǎng)細(xì)

6、胞爬片上檢測和定位某?特定的靶DNA或RNA的存在。該方法具有2個特點(diǎn)：1）墓因水平的檢測，即直接檢測DNA或KNA；2）町以明確泄位，在保存組織結(jié)構(gòu)同時(shí)揭示組織細(xì)胞的異質(zhì)性，細(xì)胞基因表達(dá)的異質(zhì)性和細(xì)胞器中的區(qū)別定位⑹。原位雜交與免疫組織化學(xué)在具體實(shí)驗(yàn)操作中有許多相似之處。滕孝靜等⑺將自動免疫組化染色儀應(yīng)用于EBER（Epstein-BarrencodedKNAs）原位雜交技術(shù)，得到了滿意的染色效果。1986年使用熒光標(biāo)記DNA探針，開啟了熒光原位雜交（HSH）時(shí)代，與原位雜交技術(shù)相比,FISH更加安全、快速、特異性好、定

7、位準(zhǔn)確。目前已應(yīng)用于外科病理學(xué)診斷中，為乳腺癌、肺癌、胃癌等實(shí)體腫瘤進(jìn)行早期診斷、個性化治療以及愈合判斷。但HSH技術(shù)操作較為繁瑣且實(shí)驗(yàn)結(jié)果較不穩(wěn)定。陳順平等⑻通過實(shí)踐,提出在HSH實(shí)驗(yàn)中控制酶消化的穩(wěn)定以及判斷細(xì)胞消化效果是對操作者必備要求.合適的消化程度是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵,也是提高雜交率和診斷準(zhǔn)確率的前提。三、原位多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)原位多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（polymerasechainreaction,PCR）是將在冷凍或石蠟包埋組織切片、細(xì)胞涂片中的核酸片段進(jìn)行奇效擴(kuò)增,來檢測細(xì)胞內(nèi)單一拷貝或低拷貝的待測核酸序列。主要應(yīng)用

8、于病原體檢測，內(nèi)源基因檢測，基因突變、基因重排和染色體易位。辛麗紅等⑼應(yīng)用原位PCR技術(shù)檢測肺癌石蠟標(biāo)本rrEN基因DNA表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)卩『EN基因在肺癌組織中的表達(dá)較正常肺組織中的低，而該基因的表達(dá)與肺癌的病理類型、組織分化程度、臨床分期，以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。臨床病理最常見的PCR技術(shù)是使用福